[發明專利]一種DC-CIK細胞培養試劑盒及其培養方法

在審

• 申請號: 201811340439.3
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109402055A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 馬玉國;孫營
• 申請（專利權）人: 廣州航華生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0784
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張春水;唐京橋

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種DC?CIK細胞培養試劑盒及其培養方法。本發明公開了一種DC?CIK細胞培養試劑盒，包括：DC細胞無血清培養基和CIK細胞無血清培養基；DC細胞無血清培養基包括第一細胞培養因子和第二細胞培養因子，CIK細胞無血清培養基包括：第三細胞培養因子、第四細胞培養因子和營養物。通過該試劑盒培養得到的DC?CIK細胞中有效細胞含量多，并且殺傷活性高，解決了現有的DC?CIK細胞的培養試劑得到的DC?CIK細胞中有效細胞含量少，殺傷活性低的技術問題。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種DC-CIK細胞培養試劑盒及其培養方法。

背景技術

腫瘤免疫治療是應用免疫學原理和方法，提高腫瘤細胞的免疫原性和對效應細胞殺傷的敏感性，激發和增強機體抗腫瘤免疫應答，并應用免疫細胞和效應分子輸注宿主體內，協同機體免疫系統殺傷腫瘤、抑制腫瘤生長。

CIK(Cytokine Induced Killer)細胞，是將人體外周血單個核細胞在體外模擬人體內環境，用多種細胞因子共同培養增殖后獲得的一群異質細胞。它具有顯著的識別和殺傷人體各種腫瘤細胞和病毒的活性，其中CD3+CD56+雙陽性細胞是CIK細胞群體中主要的效應細胞，兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優點，因此又被稱為具有NK細胞作用的T淋巴細胞，是一種廣泛應用的腫瘤免疫治療手段。

DC(Dendritic Cells)細胞是機體功能最強的專職抗原遞呈細胞，它能高效地攝取、加工處理和遞呈抗原，啟動T細胞介導的免疫反應，從而介導強大的特異性抗腫瘤細胞免疫應答。

DC細胞與CIK細胞共培養后，可促進DC與CIK細胞成熟，并可提高CIK細胞的增殖能力和腫瘤殺傷功能和CD3+、CD8+和CD3+CD56+雙陽性效應細胞的數量。DC-CIK細胞不僅能激發、增強腫瘤患者特異性抗腫瘤免疫應答，有效清除體內殘留病灶，且在患者體內誘發免疫記憶，從而獲得長期的抗瘤效應，因而能夠防治常規治療(手術、化療和放療)后腫瘤殘留病灶導致的復發。

目前，DC-CIK共培養，是將收獲的DC細胞添加到CIK培養試劑中，從而通過DC細胞與CIK細胞共培養，從而獲得DC-CIK細胞，但現有的DC-CIK共培養試劑得到的DC-CIK細胞中有效細胞含量少，殺傷活性低，CD3+、CD8+和CD3+CD56+雙陽性效應細胞的數量低。

發明內容

本發明提供了一種DC-CIK細胞培養試劑盒及其培養方法，解決了現有的DC-CIK細胞的培養試劑得到的DC-CIK細胞中有效細胞含量少，殺傷活性低，CD3+、CD8+和CD3+CD56+雙陽性效應細胞的數量低的技術問題。

其具體技術方案如下：

本發明提供了一種DC-CIK細胞培養試劑盒，包括：DC細胞無血清培養基和CIK細胞無血清培養基；

DC細胞無血清培養基包括第一細胞培養因子和第二細胞培養因子，CIK細胞無血清培養基包括：第三細胞培養因子、第四細胞培養因子和營養物；

所述第一細胞因子包括：白細胞介素4(IL-4)和細胞集落刺激生物因子(GM-CSF)；

所述第二細胞因子包括：IL-4、GM-CSF和腫瘤壞死因子α(TNF-α)；

所述第三細胞因子包括：γ干擾素(IFN-γ)；

所述第四細胞因子包括：CD3pure、白細胞介素1α(IL-1α)和白細胞介素2(IL-2)。

優選地，所述第一細胞因子中IL-4的濃度為16.7ng/ml～33.4ng/ml，更優選為33.4ng/ml，GM-CSF的濃度為60ng/ml～120ng/ml，更優選為120ng/ml。