[發(fā)明專利]一種DC-CIK細胞培養(yǎng)試劑盒及其培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811340439.3
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109402055A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發(fā)明（設計）人: 馬玉國;孫營
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州航華生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0784
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 張春水;唐京橋

1.一種DC-CIK細胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，包括：DC細胞無血清培養(yǎng)基和CIK細胞無血清培養(yǎng)基；

DC細胞無血清培養(yǎng)基包括第一細胞培養(yǎng)因子和第二細胞培養(yǎng)因子，CIK細胞無血清培養(yǎng)基包括：第三細胞培養(yǎng)因子、第四細胞培養(yǎng)因子和營養(yǎng)物；

所述第一細胞因子包括：白細胞介素4(IL-4)和細胞集落刺激生物因子(GM-CSF)；

所述第二細胞因子包括：IL-4、GM-CSF和腫瘤壞死因子α(TNF-α)；

所述第三細胞因子包括：干擾素γ(IFN-γ)；

所述第四細胞因子包括：CD3pure、白細胞介素1α(IL-1α)和白細胞介素2(IL-2)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DC-CIK細胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，所述第一細胞因子中IL-4的濃度為16.7ng/ml～33.4ng/ml，GM-CSF的濃度為60ng/ml～120ng/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DC-CIK細胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，所述第二細胞因子中IL-4的濃度為83.5ng/ml～167ng/ml、GM-CSF的濃度為300ng/ml～600ng/ml、TNF-α的濃度為25ng/ml～50ng/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DC-CIK細胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，所述第三細胞因子中IFN-γ的濃度為2500IU/ml～5000IU/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DC-CIK細胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，所述第四細胞因子中CD3pure的濃度為250ng/ml～500ng/ml、IL-1α的濃度為2.5ng/ml～5ng/ml、IL-2的濃度為500IU/ml～1000IU/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DC-CIK細胞培養(yǎng)試劑盒，其特征在于，所述營養(yǎng)物為自體血漿、小牛血清或自體血清。

7.一種采用權(quán)利要求1至6任意一項所述的DC-CIK細胞培養(yǎng)試劑盒培養(yǎng)DC-CIK細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：向外周血單個核細胞加入含有第一細胞因子的無血清培養(yǎng)基進行培養(yǎng)后，加入含第二細胞因子的無血清培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到DC細胞；

步驟2：向所述外周血單個核細胞加入含第三細胞因子的無血清培養(yǎng)基進行培養(yǎng)后，加入營養(yǎng)物和含第四細胞因子的無血清培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到CIK細胞；

步驟3：將所述DC細胞與所述CIK細胞進行共培養(yǎng)，得到DC-CIK細胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，步驟2中加入營養(yǎng)物和含第四細胞因子的無血清培養(yǎng)基進行培養(yǎng)后，得到所述CIK細胞前，還包括：加入含第五細胞因子的無血清培養(yǎng)基和所述營養(yǎng)物；

所述第五細胞因子包括濃度為1000IU/ml～2000IU/ml的IL-2。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，步驟3得到所述DC-CIK細胞1～2天前，還需加入程序性死亡受體1(PD-1)。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述PD-1的用量為5mg～10mg。