[發明專利]一種載有利福平的復合外泌體及其制備方法

有效

• 申請號: 201811338241.1
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109364259B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 胡春梅;唐秋莎;黃莉莉;張俠
• 申請（專利權）人: 南京市第二醫院（江蘇省傳染病醫院;南京市公共衛生醫療中心）
• 主分類號: A61K47/46
• 分類號: A61K47/46;A61K31/496;A61P31/04;A61P31/12
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 劉奇

本發明提供一種載有利福平的復合外泌體及其制備方法，屬于醫藥技術領域。本發明通過將利福平、外泌體和電穿孔緩沖液混合，在2～6℃下進行電穿孔處理，得到載有利福平的復合外泌體初體；將載有利福平的復合外泌體初體在35～40℃下孵育25～35min，得到載有利福平的復合外泌體。采用本發明提供的方法能夠將利福平包載到外泌體內，使載有利福平的復合外泌體的藥物濃度達到2497.5μg/mL。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種載有利福平的復合外泌體及其制備方法。

背景技術

外泌體是由細胞的質膜經兩次向內凹陷形成多泡體，多泡體再與細胞內膜融合，以胞吐的方式釋放出來的直徑在30-150nm的微囊泡。已被證明幾乎所有的人體細胞均可分泌不同性質的外泌體，且廣泛分布于各種體液。

利福平是所屬利福霉素家族的一種廣譜抗生素藥物，對結核桿菌有較強抗菌作用，對革蘭氏陽性或陰性細菌、病毒等也有療效。利福平為紅色或暗紅色的結晶狀粉末，不溶于水。與其他抗結核藥合用起協同作用，并延緩耐藥菌株產生。主要用于治療結核病、腦膜炎和金黃色葡萄球菌感染，外用可治療沙眼等。但現有技術中的利福平一般為膠囊或者片劑口服藥，還未出現相關采用外泌體包載的利福平。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種載有利福平的復合外泌體及其制備方法，能夠有效地將利福平包載到外泌體內，且外泌體內的利福平濃度高。

為了解決上述問題，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種載有利福平的復合外泌體的制備方法，包括如下步驟：

1)將利福平、外泌體和電穿孔緩沖液混合，在2～6℃下進行電穿孔處理，得到載有利福平的復合外泌體初體；

2)將所述步驟1)的載有利福平的復合外泌體初體在35～40℃下孵育25～35min，得到載有利福平的復合外泌體。

優選的，所述步驟1)中利福平、外泌體和電穿孔緩沖液的質量體積比為9～11mg:95～105μg:100μL。

優選的，所述步驟1)中電穿孔緩沖溶液為海藻糖PBS溶液，所述海藻糖PBS溶液中海藻糖的濃度為50mmol/L；所述海藻糖PBS溶液的pH值為7.2～7.5。

優選的，所述步驟1)中電穿孔處理的條件包括：電壓390～410v，電容140～160μF，放電時間0.9～1.1ms。

優選的，所述步驟2)孵育25～35min后還包括將孵育后得到的孵育液依次進行超濾、離心。

優選的，所述超濾用膜的截留分子量為100KDa。

優選的，所述離心的離心力為4500～5500g，離心的時間為25～35min。

本發明提供了一種上述方案所述的方法制備得到的載有利福平的復合外泌體；所述載有利福平的復合外泌體中利福平的濃度為2497.5μg/mL。

優選的，所述載有利福平的復合外泌體儲存在PBS緩沖液中。

與現有技術相比，本發明提供的技術方案具有以下優點：

本發明提供了一種載有利福平的復合外泌體及其制備方法，采用本發明提供的方法能夠將利福平包載到外泌體內，使載有利福平的復合外泌體中利福平的濃度達到2497.5μg/mL。同時，本發明將利福平包載到外泌體內，外泌體來源于細胞內源途徑，是由內含多個囊泡的多泡體向外出芽和胞膜融合后釋放到胞外環境中的運輸膜泡，作為天然的胞間信息載體的外泌體，以其相對較小的分子結構、天然的分子轉運特性和良好的生物相容性，增加穿過生理屏障(如血腦屏障、血睪屏障等)的能力，從而攜帶利福平更多的透過生理屏障，同時外泌體作為載體包載利福平后可以避免循環系統對利福平的清除，延長體內循環時間，從而能夠有效地提高利福平在體液中的藥物濃度。