[發(fā)明專利]一種測(cè)定疏血通注射液中次黃嘌呤含量的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811338059.6
• 申請(qǐng)日: 2018-11-12
• 公開（公告）號(hào): CN109374768A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李振國(guó);王曉明;潘桂湘;王獻(xiàn)瑞;倪開嶺;郝明;賈力夫;趙西子;胡利民;劉二偉;王丹丹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 牡丹江友搏藥業(yè)有限責(zé)任公司;天津中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 太原倍智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 14111
• 代理人: 張宏

1.一種測(cè)定疏血通注射液中次黃嘌呤含量的方法，其特征在于，包括：

步驟一，配制6-巰基嘌呤內(nèi)標(biāo)溶液和一系列次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

步驟二，在待測(cè)疏血通注射液中加入6-巰基嘌呤內(nèi)標(biāo)溶液和次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制成加標(biāo)樣品，采用液質(zhì)聯(lián)用法，進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM掃描，以加標(biāo)次黃嘌呤終濃度X為橫坐標(biāo)，目標(biāo)分析物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，獲得回歸方程；

步驟三，在待測(cè)疏血通注射液中加入6-巰基嘌呤內(nèi)標(biāo)溶液，采用液質(zhì)聯(lián)用法，進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM掃描，獲得目標(biāo)分析物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值，根據(jù)上述回歸方程獲得疏血通注射液中次黃嘌呤含量；

步驟二和步驟三中，液相色譜條件為：分析柱為Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(100mm×2.1mm,1.7μm)，保護(hù)柱為Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(5mm×2.1mm,1.7μm)，流動(dòng)相A相為甲醇，B相為0.1％甲酸水溶液，梯度洗脫，流速為0.3ml/min，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為2μl；

質(zhì)譜檢測(cè)條件為：電噴霧負(fù)離子ESI(-)檢測(cè)模式；毛細(xì)管電壓(Capillary)：0.5KV；錐孔電壓(Cone)：30V；噴霧氣壓力(Nebuliser)：7psi；脫溶劑氣溫度(Desolvation Temp)：400℃；脫溶劑氣流量(Desolvation Gas Flow)：800L·h^-1；錐孔氣流量(Cone Gas Flow)：150L·h^-1，碰撞氣氬氣流量(Collision Gas Flow)：0.25ml·min^-1；

多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM掃描方法的參數(shù)如下：

次黃嘌呤：母離子質(zhì)量數(shù)(Q1)：134.9；子離子質(zhì)量數(shù)(Q3)：92.0；駐留時(shí)間(DewllTime)：0.129s；錐孔電壓(Cone Voltage)：30V；碰撞能量(Collision Energy)：12V；

6-巰基嘌呤：母離子質(zhì)量數(shù)(Q1)：151.0；子離子質(zhì)量數(shù)(Q3)：92.1；駐留時(shí)間(DewllTime)：0.129s；錐孔電壓(Cone Voltage)：56V；碰撞能量(Collision Energy)：16V。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟一所述的配制6-巰基嘌呤內(nèi)標(biāo)溶液，包括步驟：稱取6-巰基嘌呤，加甲醇溶解、稀釋，制成250μg/ml的6-巰基嘌呤甲醇儲(chǔ)備液；移取6-巰基嘌呤儲(chǔ)備液，用甲醇-0.2％甲酸水溶液(2:8)溶解、稀釋，制成125μg/ml的6-巰基嘌呤內(nèi)標(biāo)溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟一所述的配制次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品溶液，包括步驟：稱取次黃嘌呤，加甲醇后于60℃超聲使其完全溶解，放冷，再加甲醇稀釋制成100μg/ml次黃嘌呤甲醇儲(chǔ)備液；移取次黃嘌呤儲(chǔ)備液1.00ml，用甲醇-0.2％甲酸水溶液(2:8)稀釋成50μg/ml的次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟二中，配制加標(biāo)樣品，包括步驟：移取疏血通注射液100μl共6份，各加入濃度為125μg/ml的6-巰基嘌呤內(nèi)標(biāo)溶液100μl，分別加入濃度為50μg/ml的次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品溶液0μl、100μl、200μl、300μl、400μl、500μl；然后用稀釋劑甲醇-0.2％甲酸水溶液(2:8)稀釋至1.00ml，渦旋、混勻；各取100μl，再用適量稀釋劑甲醇-0.2％甲酸水溶液(2:8)稀釋10倍，渦旋、混勻；分別取200μl，用甲醇-0.2％甲酸水溶液(2:8)稀釋5倍制成含內(nèi)標(biāo)250ng/ml、含加有次黃嘌呤終濃度為0ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml的加標(biāo)溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：梯度洗脫程序?yàn)椋?～0.5min(15％A、85％B)；0.5～0.6min(95％A、5％B)，0.6～1.0min(95％A、5％B)；1.0～1.1min(5％A、95％B)；1.1～3.5min(5％A、95％B)。