[發明專利]一種測定疏血通注射液中次黃嘌呤含量的方法

在審

• 申請號: 201811338059.6
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109374768A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 李振國;王曉明;潘桂湘;王獻瑞;倪開嶺;郝明;賈力夫;趙西子;胡利民;劉二偉;王丹丹
• 申請（專利權）人: 牡丹江友搏藥業有限責任公司;天津中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 太原倍智知識產權代理事務所(普通合伙) 14111
• 代理人: 張宏

本發明涉及一種測定疏血通注射液中次黃嘌呤含量的方法，在待測疏血通注射液中加入6?巰基嘌呤內標溶液和次黃嘌呤標準品溶液配制成加標樣品，采用液質聯用法，進行多反應監測MRM掃描，以加標次黃嘌呤終濃度X為橫坐標，目標分析物與內標的峰面積比值Y為縱坐標，進行線性回歸，獲得回歸方程；然后在待測疏血通注射液中加入6?巰基嘌呤內標溶液，采用液質聯用法，進行多反應監測MRM掃描，獲得目標分析物與內標的峰面積比值，根據上述回歸方程獲得疏血通注射液中次黃嘌呤含量。本發明建立的檢測方法，可快速、準確的檢測疏血通注射液中次黃嘌呤的含量，有效減小基質效應的干擾。

技術領域

本發明屬于藥物分析技術領域，涉及一種定量分析方法，特別是涉及一種準確測定疏血通注射液中次黃嘌呤含量的方法。

背景技術

疏血通注射液由水蛭和地龍組方而成，具有活血化瘀、通經活絡的功效，用于瘀血阻絡所致的缺血性中風病中經絡急性期，癥見半身不遂、口舌歪斜、語言謇澀。次黃嘌呤為生物體內嘌呤堿基代謝過程的主要中間產物之一，具有生物活性，能透過細胞膜進入細胞內，提高多種酶的活性，參與調節人體一些重要的生理機能，其中對心血管作用尤為明顯，因此選擇次黃嘌呤作為疏血通注射液的含量測定指標成分。

目前，疏血通注射液中次黃嘌呤的含量測定采用的是高效液相色譜-紫外法(HPLC-UV)。經預實驗發現，當疏血通注射液中的次黃嘌呤在色譜上如若未能與其他結構類似的核苷酸堿基完全分離時，由于干擾物的紫外最大吸收波長λ_max與次黃嘌呤接近，因此含量測定結果將會與真實值有一定的偏差。而如果采用液質聯用法(LC-MS/MS)測定，無需色譜完全分離即可利用質譜獨特的質量分辨能力，采用多反應離子監測(MRM)模式對次黃嘌呤進行掃描，從而有效減小其他核苷酸堿基可能造成的干擾，快速、專屬、靈敏地檢測疏血通注射液中次黃嘌呤的含量。

但質譜作為一種質量型檢測器，美中不足的是定量結果或多或少會受到基質效應的影響。為了消除樣品基質的干擾，通常采用色譜法在線去除基質，或者采用液液萃取、固相萃取法等對樣品進行除雜前處理。上述操作，要么對工作人員的色譜分離技能要求較高，要么操作步驟繁雜、工作量較大。因此，開發一種更加經濟、有效，且適用于準確測定疏血通注射液中次黃嘌呤的檢測方法尤為重要。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種測定疏血通注射液中次黃嘌呤含量的方法，以至少實現提高測定準確性和專屬性的目的。

為解決以上技術問題，本發明采用的技術方案是：

一種測定疏血通注射液中次黃嘌呤含量的方法，包括：

步驟一，配制6-巰基嘌呤內標溶液和一系列次黃嘌呤標準品溶液；

步驟二，在待測疏血通注射液中加入6-巰基嘌呤內標溶液和次黃嘌呤標準品溶液配制成加標樣品，采用液質聯用法，進行多反應監測MRM掃描，以加標次黃嘌呤終濃度X為橫坐標，目標分析物與內標的峰面積比值Y為縱坐標，進行線性回歸，獲得回歸方程；

步驟三，在待測疏血通注射液中加入6-巰基嘌呤內標溶液，采用液質聯用法，進行多反應監測MRM掃描，獲得目標分析物與內標的峰面積比值，根據上述回歸方程獲得疏血通注射液中次黃嘌呤含量；

步驟二和步驟三中，液相色譜條件為：分析柱為Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(100mm×2.1mm,1.7μm)，保護柱為Waters Acquity UPLC BEH C₁₈(5mm×2.1mm,1.7μm)，流動相A相為甲醇，B相為0.1％甲酸水溶液，梯度洗脫，流速為0.3ml/min，柱溫為40℃，進樣量為2μl；