[發明專利]一種用于非小細胞肺癌診斷的外周血miRNA標志物

在審

• 申請號: 201811336972.2
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109207599A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 鄒瑞陽;蘇丹;程赫;應莉莎;周礪寒
• 申請（專利權）人: 覓瑞（杭州）生物科技有限公司;浙江省腫瘤醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 杭州知見專利代理有限公司 33295
• 代理人: 趙越劍

本發明公開了一種用于非小細胞肺癌診斷的外周血miRNA標志物，所述外周血miRNA標志物包括hsa?miR?1291、hsa?miR?1?3p、hsa?miR?214?3p中至少一種。本發明基于大量樣本驗證，明確3個適用于中國人群非小細胞肺癌的特異性診斷標志物，相對國際上報道的其它miRNA標志物，具備有更高的人群特異性；這3個miRNA診斷標志物均為首次提出，相較于其他miRNA分子標志物更可靠。

技術領域

本發明涉及疾病早期檢測技術領域，特別涉及一種用于非小細胞肺癌診斷的外周血miRNA標志物。

背景技術

肺癌是全世界范圍內腫瘤死亡的首要原因，2016年中國癌癥中心發布的統計顯示，在429萬新發癌癥病人群中，肺癌是73.3萬；在280萬的癌癥死亡人數中，肺癌占據了其中的61萬，是我國名副其實的“第一癌癥”。其中，非小細胞肺癌約占所有肺癌的80％，約75％的患者發現時已處于中晚期，5年生存率很低。因為肺癌早期癥狀不明顯，75％的肺癌患者就診時已有局部浸潤和遠處轉移，失去了手術治療的機會，而目前的治療手段對肺癌總生存率的提高效果不大，II-IV期肺癌患者5年生存率大約在40％-5％之間，而I期患者5年生存率可高達92％。因此，加強對高危人群的篩查，提高早診、早治率是減少肺癌死亡率的最有效方法。

X胸片和痰涂片是肺癌篩查最常規的技術，但其敏感性太低；纖支鏡刷檢或活檢能直接窺視病灶，能病理定性，但有創，難以在大樣本人群中推廣；低劑量螺旋CT是目前被認為最有效的肺癌篩查技術，無創、敏感性高，然而有高達96.4％的假陽性率，而且篩查的成本比較高。因此需要開發新的微創、經濟、敏感性和特異性均比較高的早期篩查的技術。

微小核酸(microRNA，miRNA)是近年來發現的一類長度為19—25個核苷酸的非編碼小分子RNA。它主要通過與靶標基因3'UTR的完全或不完全配對,降解靶標基因mRNA或抑制其翻譯,從而參與調控個體發育、細胞凋亡、增殖及分化等生命活動，在腫瘤的發生和發展過程中發揮著類似于致癌基因或抑癌基因的功能。miRNA的表達譜具有明顯的組織特異性,在不同腫瘤中具有特定的表達模式。這些特點使得miRNA有可能成為腫瘤診斷新的生物學標記和治療靶標。同已知的循環核酸(DNA和RNA)一樣,miRNA廣泛存在于肺癌高危健康人和腫瘤患者的血清中,其種類和數量會隨著生理狀況和病程變化而改變。循環miRNA可能來自于凋亡或壞死的細胞，或者是細胞的主動釋放和循環細胞的裂解。這些內源循環miRNA分子多數不是以游離形式存在,而是與蛋白等構成顆粒,因而內源性的循環RNA分子具有良好的抗RNase降解能力,有較高的穩定性。這一特性為循環miRNA作為生物標志物進行檢測提供了可能。

許多研究報道了miRNA在肺癌中的異常表達，盡管現有的研究發現了許多非常有前景的肺癌早期診斷血清miRNA，但由于檢測對象包含組織，血清，血漿等，檢測方法包含測序法，擴增法，雜交法等，研究中入組樣本的選取不嚴格；各種因素缺乏一致性，導致非小細胞肺癌的miRNA標志物沒有統一的定論，這些結果并不一致，并且不能相互驗證，最終能用于肺癌篩查的血清miRNA生物標志物以及生物標志物組合標志物還未見定論。

其中最關鍵的原因有以下兩點：

1、病例和對照樣本的選取、收集、保存過程中出現偏差。樣本的類別不同，必然會對生物標志物的研發、驗證帶來不確定性。外周血中變化的miRNA主要是由肺癌相關細胞分泌到細胞外的，其組成成分與細胞內或者全血樣本中必然不同，同時也會受到其他因素的影響，例如是否經過治療等。大多數miRNA是穩定的存在于健康人群以及癌癥人群的外周血中的，并由身體各種組織細胞分泌，各類環境、遺傳等非癌癥因素，均會影響其表達量。為了排除影響，需要選取大量的人群樣本作為研發、驗證，以確定生物標志物的真實性。同時，已有研究證明，通過使用不同方法分離、儲存的外周血樣本，其生物標志物含量也會有所不同。通過癌癥組織細胞找到的生物標志物、通過對比晚期癌癥找到的生物標志物、通過對比使用不同方法分離、保存的樣本找到的生物標志物以及沒有經過大量樣本研發、驗證過的生物標志物，都可能是假陽性的結果，不一定能經得起大規模實驗的驗證。