[發明專利]用于檢測和/或輔助檢測致手足口病毒EV71的引物組、試劑和試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201811336211.7
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN109295260A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 董進法;姚雪春;盧星忠;梁耀極;張學峰;張天宇;姚文清;毛玲玲
• 申請（專利權）人: 遼寧佰昊生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 嚴誠

本發明涉及生物技術領域，具體而言，提供了一種用于檢測和/或輔助檢測致手足口病毒EV71的引物組、試劑和試劑盒及檢測方法。本發明針對致手足口病毒EV71的保守序列，設計特異性RPA擴增引物組，引物組包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，同時基于該引物組建立了致手足口病毒EV71的檢測方法，可對致手足口病毒EV71進行定性檢測。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體而言，涉及一種用于檢測和/或輔助檢測致手足口病毒EV71的引物組、試劑和試劑盒及檢測方法。

背景技術

手足口病常見于學齡前兒童，嬰幼兒多見，該病可引起發熱和手、足、口腔等部位的皮疹、潰瘍，一般預后良好，但也有出現心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜炎等并發癥。手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，腸道病毒共有20多種，其中，柯薩奇病毒A組16型(coxsackievirus A16，CVA16)與腸道病毒71型(enterovirus type 71，EV71)均為手足口病的主要致病原。EV71所致的手足口病通常癥狀更典型、并發癥的發生率和致死率均較高。由于不同型病毒所導致的手足口病的治療方式不同，及時準確區分不同型致病病毒對患兒的治療尤為重要。

目前對于致手足口病毒的檢測有各種不同的方法，但是，都有各自的缺點。細胞病變效應檢測法實驗周期太長且靈敏度低。免疫熒光法和Western blot法對于病毒感染量有一定要求，較低的感染量無法檢測病毒。實時熒光聚合酶鏈反應(realtime polymerasechain reaction，Real-Time PCR)、一步法RT-PCR、巢式PCR法均為基于傳統PCR的方法，需要變性、退火、延伸三個步驟，每個步驟的溫度不一樣，需要專門的熱循環儀來進行，限制了其使用范圍。因此，開發一種簡便、快捷、成本低并且適用范圍廣的檢測方法具有重要意義。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一種用于檢測和/或輔助檢測致手足口病毒EV71的引物組，本發明的第二目的在于提供上述引物組在制備檢測和或輔助檢測致手足口病毒EV71的產品中的應用，本發明的第三目的在于提供一種試劑，本發明的第四目的在于提供一種試劑盒，本發明的第五目的在于提供一種致手足口病毒EV71的檢測方法，以緩解現有技術中缺少一種可以快速、簡便、準確檢測EV71的方法的技術問題。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一種用于檢測和/或輔助檢測致手足口病毒EV71的引物組，所述引物組包括SEQID NO.1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

上述引物組在制備檢測和或輔助檢測致手足口病毒EV71的產品中的應用。

進一步地，所述產品包括試劑或試劑盒。

一種試劑，包括上述引物組。

進一步地，所述試劑包括陽性對照樣品；

優選地，所述陽性對照樣品為含有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的DNA質粒。

進一步地，所述引物組中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列和SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的終濃度均獨立的為0.38-0.58μmol/L；

優選地，所述陽性對照樣品的終濃度為0.1-0.3ng/μL。

一種試劑盒，包括上述引物組。

進一步地，所述試劑盒包括陽性對照樣品；

優選地，所述陽性對照樣品為含有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的DNA質粒；