[發明專利]一種無血清成分的高效間充質干細胞培養液

在審

• 申請號: 201811332303.8
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN109402050A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 李劍平;李曉豐
• 申請（專利權）人: 沈陽中心血站
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 史力伏

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種間充質干細胞培養液。本發明中的間充質干細胞培養液，包括以下成分：人血小板裂解液、青鏈霉素（Pen Strep）、長效谷氨酰胺、趨化因子XCL1、趨化因子CCL3、熱休克蛋白(HSP70)、端粒酶抑制劑IFN?α 2b、基礎培養基DMEM。該干細胞培養液成分來源廣泛，培養的間充質干細胞純度高，增殖快，干性好，適合進行體外大規模培養以進行臨床前研究和相關臨床研究。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種間充質干細胞培養液。

背景技術

間充質干細胞（Mesenchymal stem cells）是一類具有多向分化潛能的成體干細胞，源于發育早期的中胚層，主要存在于結締組織和器官間質中，可以從骨髓、外周血、脂肪及皮膚等多種組織中獲得。間充質干細胞屬于非終末分化細胞，它既有間質細胞的特征，又有內皮細胞及上皮細胞的特征；作為一類多能干細胞，它在體外特定的誘導條件下，可以向骨、軟骨、肌肉等方向增殖分化。目前研究表明間充質干細胞對系統性紅斑狼瘡、帕金森病、脊髓損傷等都有一定治療效果。

近年來，對間充質干細胞的研究日益增多，研究成果也在逐步走向臨床應用，其中間充質干細胞的體外擴增培養是臨床研究及應用的前提。但是在通常條件下，間充質干細胞在長期培養中易發生老化和凋亡，這些問題限制了間充質干細胞的進一步發展，尋找適合間充質干細胞的體外大規模培養體系，成為深入研究和應用間充質干細胞的熱點之一。

目前間充質干細胞的體外培養擴增體系主要是在基礎培養基中添加一定濃度的胎牛血清或者生長因子，如專利20121021322.X中加入了B27和bFGF和EGF。這些生長因子的加入，可能導致體外擴增培養細胞的意外分化，使間充質干細胞失去干性。

發明內容

為彌補現有技術的不足，本發明提供一種無血清成分的高效間充質干細胞培養液，該干細胞培養液成分來源廣泛，培養的間充質干細胞純度高，增殖快，干性好，適合進行體外大規模培養以進行臨床前研究和相關臨床研究。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案。

一種無血清成分的高效間充質干細胞培養液，包括以下成分： 10%人血小板裂解液、0.4%青鏈霉素（Pen Strep）、2mmol/L長效谷氨酰胺、15ng/ml趨化因子XCL1、25ng/ml趨化因子CCL3、18ng/ml熱休克蛋白(HSP70)、26ng/ml端粒酶抑制劑 IFN-α 2b、基礎培養基為DMEM。

所述的無血清成分的高效間充質干細胞培養液pH值為6.8~7.0，滲透壓為310mOsm/kg。

所述的無血清成分的高效間充質干細胞培養液的制備方法，包括以下步驟。

1. 人血小板裂解液的制備。

（1）取2×10¹¹ L^-1的機采人血小板，加入250ml 離心瓶中，6000g 室溫離心20min。

（2）去上清，加入生理鹽水洗血小板，2000g室溫離心10min后用15ml生理鹽水懸起。

（3）置于-20℃冰箱中冷凍過夜，后置于室溫下融化。

（4）如此進行三個循環，得血小板裂解液。

2. 間充質干細胞培養液的制備。

分別取100ml人血小板裂解液、4ml Pen Strep（青鏈霉素）、2mmol 長效谷氨酰胺、15ng/ml趨化因子XCL1、25ng/ml趨化因子CCL3、18ng/ml熱休克蛋白（HSP70），26ng/ml端粒酶抑制劑IFN-α 2b混合，然后用基礎培養基DMEM補至1L體積，調節pH值為6.8~7.0，滲透壓為310 mOsm/kg，即得本發明間充質干細胞培養液。