[發明專利]一種表達制備UDP-葡萄糖-4-差向異構酶的方法

有效

• 申請號: 201811331222.6
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN109402152B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 李拖平;李蘇紅;孫玥;佟超男
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N15/61
• 分類號: C12N15/61;C12N15/75;C12N1/21;C12N9/90;C12R1/125
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 胡洋

1.一種表達制備UDP-葡萄糖-4-差向異構酶的方法，其特征在于，方法如下：

1）將UDP-葡萄糖-4-差向異構酶基因與表達載體連接，構建重組表達載體；所述表達載體是pHT系列載體、穿梭載體pMA5或穿梭載體pWB980；所述UDP-葡萄糖-4-差向異構酶基因的序列如SEQ ID NO:1所示；

2）將重組表達載體電轉化至宿主菌中構建重組工程菌；所述宿主菌是枯草芽孢桿菌（bacillus subtilis ） WB800N、枯草芽孢桿菌（ bacillus subtilis ） WB800、枯草芽孢桿菌（ bacillus subtilis ） 168、枯草芽孢桿菌（ bacillus subtilis ） WB600；

3）將高效表達UDP-葡萄糖-4-差向異構酶的重組工程菌以1-10%的接種量在接種于液體培養基中，于180rpm培養至OD₆₀₀=0.8時，加入IPTG至終濃度為1 mM，然后在35℃、120rpm條件下誘導培養18小時，菌液離心，取上清液；所述的液體培養基是含有抗生素的LB液體培養基。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述pHT系列載體是pHT43、pHT304或pHT01載體。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述表達載體中含有蛋白純化標簽。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白純化標簽是組氨酸 (His-tag)標簽。