[發明專利]大蒜莖尖培育的良種繁育方法

在審

• 申請號: 201811328890.3
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN109220807A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 王海平;李錫香;武亞紅;宋江萍;張曉輝;邱楊;沈鏑
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安知誠思邁知識產權代理事務所(普通合伙) 61237
• 代理人: 麥春明

大蒜莖尖培育的良種繁育方法，選取當年收獲的10月至第二年6月的飽滿無病傷大蒜鱗芽，去除外葉；在無菌環境用70％酒精浸沒大蒜鱗芽，振蕩30～60sec，然后用無菌水沖洗1～2次，再用10％次氯酸鈉溶液振蕩滅菌10min，最后用無菌水洗滌5～7次進行大蒜鱗芽脫毒；8～40倍解剖鏡下，無菌培養皿內，用消毒后解剖針將大蒜鱗芽的葉片和葉原基剝掉，將剝離好的莖尖接種在接種培養基內培養18～22天，生成組培苗；將組培苗轉移在莖尖分化培養基內，20天后生成分化苗，將分化苗繼續擴繁3代或者轉移至生根培養基內，30～40天分化成再生植株；再將再生植株微型蒜誘導或田間移栽，獲得原原種；最后移栽原原種，繁育良種大蒜。

技術領域

本發明屬于農產品種植領域技術領域，特別是涉及一種大蒜莖尖培育的良種繁育方法。

背景技術

大蒜(Allium sativum L.)為百合科(Liliaceae)蔥屬植物(Allium spp.)，大蒜是典型的無性繁殖作物,在生產上通常采用鱗莖繁殖，病毒一旦侵入大蒜植株，因鱗莖母體帶病毒，以垂直傳染方式傳給后代，致使大蒜體內病毒濃度逐代增高，引起種性退化，產量及品質逐年降低。

莖尖培養是解決上述問題的重要途徑。在蔬菜中，馬鈴薯試管薯的誘導技術已經非常成熟，百合等蔬菜在組織培養器皿中可以直接由組培苗誘導形成鱗莖、同樣以鱗莖進行無性繁殖的大蒜，也可能基于組織培養及相關的誘導技術，建立微型姜誘導體系。這樣以加快優質種姜繁殖，縮短生長周期，形成工廠化生產。同時，離體保存作為種質資源圃活體保存的替代技術，是保持無性繁殖種質資源多樣性的重要保證，已成為資源研究領域的重要課題和研究熱點。

雖然大蒜的組織培養和微型蒜的形成在過去已經有一些研究報道，也為大蒜的組織快繁殖奠定了一定研究基礎。但傳統莖尖脫毒的方法繁殖系數低和周期長是障礙脫毒蒜產業化的難題。為此，建立大蒜組織快繁、良種繁育技術非常必要。此技術可在大蒜組織培養快繁和工廠化種苗生產中應用。同時，還可為大蒜種質資源安全保存及資源高效分發利用提供技術保障。

發明內容

本發明的目的在于提供一種大蒜莖尖培育的良種繁育方法，通過對大蒜莖尖脫毒后接種培育，獲得試管苗，經過試管苗繼代擴繁分化和植株再生獲得一定數量的再生植株，解決大蒜繁殖系數低而難以產業化的問題。

本發明所采用的技術方案是，大蒜莖尖培育的良種繁育方法，具體步驟如下：

步驟一、選取材料：選取當年收獲的10月至第二年6月的飽滿無病傷大蒜鱗芽，將大蒜鱗芽去除外葉，置于干凈的器皿內，用沙布封口；

步驟二、接種環境滅菌消毒：對超凈工作臺、手和攝子殺菌消毒；

步驟三、大蒜鱗芽脫毒：在超凈工作臺無菌環境，先用70％酒精浸沒大蒜鱗芽，振蕩30～60sec，然后用無菌水沖洗1～2次，再用10％次氯酸鈉溶液振蕩滅菌10min，最后用無菌水洗滌5～7次；

步驟四、剝取大蒜莖尖進行接種：在無菌培養皿內，將大蒜鱗芽置于8～40倍解剖鏡下，用消毒后解剖針將大蒜鱗芽的葉片和葉原基剝掉，將剝離好的莖尖接種在接種培養基內培養18～22天，生成組培苗；

步驟五、植株分化和再生：將無毒的組培苗轉移在莖尖分化培養基內，20天分化為分化苗，再將分化苗繼續擴繁3代或者轉移至生根培養基內，30～40天分化成再生植株；

步驟六、獲得原原種：對再生植株進行微型蒜誘導或者田間移栽，獲得原原種；

步驟七、移栽原原種，繁育良種大蒜。

進一步的，所述步驟四的接種培養基為B5+6-BA0.1mg/l+NAA 0.1mg/l+3％蔗糖培養基。

進一步的，所述步驟五的莖尖分化培養基為B5+6-BA 1.0mg/l+NAA 0.1mg/l+PP3333.0ppm+3％蔗糖培養基。