[發明專利]一種快速、低成本從雞血中分離PCR模板的方法

在審

• 申請號: 201811326872.1
• 申請日: 2018-11-08
• 公開（公告）號: CN109402112A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 龔炎長;駱薇;袁楊楊
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

本發明公開了一種快速、低成本從雞血中分離PCR模板的方法，步驟是：A、從血樣中分離血細胞核：向1.5mL EP管中加入新鮮、冷凍的抗凝雞血樣品，4000rpm離心1分鐘去上清；向管中加入500μl滅菌水，靜置1分鐘，9500rpm離心3分鐘，棄上清；B、裂解細胞核：使用剪去槍頭尖部的槍頭向沉淀中加入200μl滅菌水搖勻的3－4％螯合型離子交換樹脂溶液，混勻后，55－57℃水浴30分鐘，再放入干熱儀，100℃加熱8分鐘；C、PCR模板分離：9500rpm離心2分鐘，取上清作為PCR模板。該法所獲取的PCR模板與現有的傳統DNA提取方法獲得模板在用于PCR技術檢測具有同等功效，操作上更加簡單易行、耗時短(1小時以內)、成本低(約0.31元/樣)，適用于利用PCR技術進行的各種快速DNA分子檢測實驗。

技術領域

本發明屬于核酸快速提取技術領域，尤其涉及快速、低成本 從雞血中分離PCR模板(DNA)的方法，可以快速、低成本從雞 血中分離出DNA作為PCR模版用于各種快速DNA分子檢測的實 驗。

背景技術

隨著分子生物學技術的高速發展，各種DNA分子檢測技術已 逐步運用到醫學、農業、環境及生物學等領域。目前在農業領域， PCR擴增技術已經廣泛應用于育種或疾病診斷工作中，可檢測的特 定疾病以及相關性狀等的關聯基因。在這些工作中有些需要進行 快速鑒定或診斷、有些實驗需進行大量樣本檢測；但利用PCR檢 測時模板DNA的分離時間與成本嚴重制約這類技術的廣泛使用， 因此如何快速、低成本分離PCR模板(DNA)是提高這類技術使 用效率的關鍵。采集血樣具有不殺死動物、經濟實用且易獲取等 優點，在實際操作中常從動物血液中提取DNA。

傳統苯酚氯仿法是目前提取血液DNA的常用方法，這種方法 需要蛋白酶K較長時間消化處理血樣，具有耗時長、實驗試劑毒 性大，操作過程復雜等缺點。而市面上相關的商業化試劑盒方法 提取DNA的方法費用相對較高，且提取的DNA純度和濃度都較低， 因此容易降解不易長期保存利用，存放較長時間后就無法作為模 板進行下游PCR擴增反應。本專利使用的螯合型離子交換樹脂溶 液是一種聚苯乙烯基體離子交換樹脂和滅菌水配置的，它可以高 與二價金屬離子螯合，避免金屬離子在高溫和低離子強度溶液中 活化DNA酶使DNA降解。另外，其懸液在堿性環境和100℃高溫 條件下可使包裹DNA的蛋白質變性從而從細胞核中釋放DNA。在 當前的PCR檢測實踐中，采用傳統的DNA提取方法耗時長，不足 以滿足更有效、快速地獲取PCR模板的需求。為了更快速、低成 本地大批量從雞血中分離PCR模板(DNA)，申請人在借鑒和改進 前人工作的基礎上，篩選出了一種螯合型離子交換樹脂裂解細胞 核并建立了一種可以快速、低成本從雞血中獲取PCR模板的方法， 所獲取的PCR模板(DNA)與現有的傳統DNA提取方法獲得模板 在用于PCR技術檢測具有同等功效，經檢索未發現一種快速、低 成本從雞血中分離PCR模板(DNA)的方法公開或使用。

發明內容

鑒于上述情況中現有技術存在的問題，本發明的目的是在于 提供了一種快速、低成本從雞血中分離PCR模板(DNA)的方法， 所獲取的PCR模板(DNA)與現有的傳統DNA提取方法具有同等 功效的同時，本方法操作步驟更簡單、易于操作、耗時極短，提 取過程高效，試劑材料用量少，成本更加低廉。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術措施：

本發明的提取方法基于螯合型離子交換樹脂溶液從雞血樣品 快速、低成本地分離PCR模板(DNA)。

一種快速、低成本從雞血中分離PCR模板(DNA)的方法， 其步驟是：

A、從血樣中分離血細胞核：向1.5mL EP管中加入10－20μl 新鮮、冷凍(需解凍)的抗凝雞血樣品，4000rpm離心1分鐘去 上清；向管中加入500μl滅菌水，靜置一分鐘，9500rpm離心2 －4分鐘，棄上清；