[發(fā)明專(zhuān)利]一種鑒定腎移植預(yù)后生物標(biāo)記物的方法及其檢測(cè)試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811324087.2
• 申請(qǐng)日: 2018-11-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109187814A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗娟;何燕利;徐巖
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 青島大學(xué)附屬醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供了一種鑒定腎移植術(shù)后的生物標(biāo)記物的方法及其檢測(cè)試劑盒。所述生物標(biāo)記物為血清中經(jīng)過(guò)柱前1?苯基?5?甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和葡萄糖與甘露糖濃度的比值。本發(fā)明檢測(cè)方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法。本發(fā)明的技術(shù)方案具有前處理簡(jiǎn)單，分析時(shí)間短，儀器價(jià)格合理，符合常規(guī)使用，操作步驟簡(jiǎn)單易學(xué)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性高，只需采血便可，并且所需血清量極少，采血量小于1mL等優(yōu)點(diǎn)。所得結(jié)果顯示此分析方法可以快速定量腎移植術(shù)后患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖，對(duì)于研究血清游離甘露糖及葡萄糖與腎移植術(shù)后之間的關(guān)系、尋找新型腎移植術(shù)后臨床預(yù)后監(jiān)測(cè)標(biāo)志物有著非常重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒定腎移植術(shù)后的預(yù)后生物標(biāo)記物的方法及其檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

腎臟是泌尿系統(tǒng)一個(gè)重要的器官，主要功能是生成和排泄尿液，并以此排泄人體代謝廢物，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定起重要作用；另外，腎臟也是一個(gè)內(nèi)分泌器官，主要調(diào)節(jié)血壓、紅細(xì)胞生成和骨骼生長(zhǎng)等。因此，腎臟產(chǎn)生疾病對(duì)人體的機(jī)能產(chǎn)生很大影響。腎移植的存活率受慢性移植惡化的影響，而慢性移植惡化的起因在腎移植的早期階段很難檢測(cè)，但是，早期干預(yù)治療是提高腎移植存活率的最有效的時(shí)期。目前，通過(guò)腎活檢監(jiān)測(cè)移植物臨床特征和形態(tài)仍然是檢測(cè)腎衰竭的基礎(chǔ)，但是這種方法創(chuàng)傷較大。到目前為止，盡管有很多針對(duì)腎移植失敗的預(yù)測(cè)的研究，也已經(jīng)確定了幾個(gè)候選的監(jiān)測(cè)腎移植后慢性抗宿主疾病生物標(biāo)志物，但是還沒(méi)有鑒定的建立有廣泛的臨床功能或能夠取代腎活檢的有效的候選生物標(biāo)志物。從微創(chuàng)獲得的血清樣本得到的預(yù)測(cè)生物標(biāo)志物可以改善腎移植排斥或衰竭過(guò)程的早期診斷，有助于識(shí)別腎移植后排斥反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)特別高的患者，從而幫助量身定制治療方案和進(jìn)行定期隨訪檢查。

人體血清游離單糖中葡萄糖的含量最高，正常人的范圍為3.90～6.16mmol/L。目前，醫(yī)院檢驗(yàn)科可以直接通過(guò)測(cè)生化指標(biāo)檢測(cè)葡萄糖濃度，暫時(shí)不可以直接檢測(cè)甘露糖濃度。健康成人血漿中游離甘露糖的濃度范圍為20～80μmol/L。甘露糖的含量約為葡萄糖含量的1％。它大部分被認(rèn)為是由細(xì)胞中的葡萄糖異構(gòu)化而來(lái)。而近來(lái)有研究表明，細(xì)胞中流出的游離的甘露糖是哺乳動(dòng)物血液中游離甘露糖的主要來(lái)源。這兩部分來(lái)源的游離甘露糖維持著血清中甘露糖的穩(wěn)定。D-甘露糖是糖蛋白，細(xì)胞表面糖綴合物和糖基化磷脂酰肌醇錨定蛋白等結(jié)構(gòu)中必需的單糖。其中，甘露糖是各種多糖復(fù)合物中N-糖鏈的重要組分，N-聚糖中的甘露糖殘基來(lái)源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游離甘露糖是正常的血漿成分。目前，血清甘露糖的測(cè)定方法主要有酶法、氣液色譜法、高分辨液相層析、氣液色譜-質(zhì)譜法和毛細(xì)管電泳法等。但這些方法均存在一定的不足之處。比如，使用酶法、氣液色譜法和高分辨液相層析時(shí)，為避免高濃度的葡萄糖的影響需要將其去除，致使前處理過(guò)程比較繁瑣；氣液色譜-質(zhì)譜法儀器價(jià)格昂貴，不適合常規(guī)目的；所需血清樣本量大。目前沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)腎移植術(shù)后患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供用于鑒定腎移植術(shù)后的預(yù)后生物標(biāo)記物及其應(yīng)用，本發(fā)明采用柱前PMP衍生的高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)腎移植術(shù)后患者血清中的單糖，尤其涉及血清中游離甘露糖和葡萄糖的檢測(cè)。本發(fā)明的技術(shù)方案可以用于檢測(cè)腎移植術(shù)后患者或正常人血清游離甘露糖和葡萄糖濃度，可以用于監(jiān)測(cè)腎移植術(shù)后患者的預(yù)后狀況。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

用于鑒定腎移植術(shù)后的預(yù)后生物標(biāo)記物，所述預(yù)后生物標(biāo)記物為血清經(jīng)過(guò)柱前PMP衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和和葡萄糖與甘露糖濃度的比值(G/M濃度比)。

用于鑒定腎移植術(shù)后的預(yù)后生物標(biāo)記物的定量分析方法，其特征在于：該方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法，包括以下具體步驟：

(1)調(diào)節(jié)pH為7-14：取待檢測(cè)的血清樣品加超純水于EP管中，加入氫氧化鈉，渦旋混勻；

(2)PMP衍生：每個(gè)樣品加入PMP，渦旋混勻，離心后置于烘箱反應(yīng)；