[發明專利]一種鑒定胃癌生物標記物的方法及其檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201811323691.3
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109342594A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 張麗娟;單鳴;趙剛
• 申請（專利權）人: 青島大學附屬醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種鑒定胃癌的生物標記物的方法及其檢測試劑盒。所述生物標記物為血清中經過柱前1?苯基?5?甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜得到的游離葡萄糖、甘露糖和葡萄糖與甘露糖濃度的比值。本發明檢測方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法。本發明的技術方案具有前處理簡單，分析時間短，儀器價格合理，符合常規使用，操作步驟簡單易學，檢測結果準確性高，只需采血便可區分正常人和胃癌患者，并且所需血清量極少，采血量小于1mL等優點。所得結果顯示此分析方法可以快速定量胃癌患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖，對于研究血清游離甘露糖及葡萄糖與胃癌之間的關系、尋找新型胃癌臨床檢測標志物有著非常重要的意義。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種鑒定胃癌的生物標記物的方法及其檢測試劑盒。

背景技術

胃癌是全球第四大癌癥和癌癥死亡的第二大原因，每年新增確診患者超過95萬次，胃癌也是東亞人群中最普遍流行的消化道腫瘤之一，我國每年新發病患約占全球47％，嚴重危害國人健康。大多數早期胃癌患者無癥狀，當診斷時已是晚期，因此合理的早期篩查是提高胃癌患者治愈率、提高患者生活中質量的關鍵。最理想的早期診斷是不需活檢的血液分析。目前依靠腫瘤分泌到血液中的癌細胞生物標志物進行癌癥診斷要求腫瘤不小于20.44mm³，此時腫瘤已有10.1年的生長歷史。因此，最理想的狀態是在腫瘤還未長到20.44mm³時就能通過常規體檢抽血進行早期血液診斷。目前臨床使用的血液特異性的生物標志物確診癌癥的概率為70％～80％，非特異性的腫瘤標志物種類多于特異性的生物標志物，其確診概率約為20％～30％。由于客觀存在的較高的假陰性假陽性血液檢測結果，目前胃癌的診斷還需要借助進一步的影像、病理等檢查結果來確診患者病情。因此亟需更好的有助于胃癌早期診斷及預后判定的血清生物學指標。

人體血清游離單糖中葡萄糖的含量最高，正常人的范圍為3.90～6.16mmol/L。目前，醫院檢驗科可以直接通過測生化指標檢測葡萄糖濃度，暫時不可以直接檢測甘露糖濃度。健康成人血漿中游離甘露糖的濃度范圍為20～80μmol/L。甘露糖的含量約為葡萄糖含量的1％。它大部分被認為是由細胞中的葡萄糖異構化而來。而近來有研究表明，細胞中流出的游離的甘露糖是哺乳動物血液中游離甘露糖的主要來源。這兩部分來源的游離甘露糖維持著血清中甘露糖的穩定。D-甘露糖是糖蛋白，細胞表面糖綴合物和糖基化磷脂酰肌醇錨定蛋白等結構中必需的單糖。其中，甘露糖是各種多糖復合物中N-糖鏈的重要組分，N-聚糖中的甘露糖殘基來源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游離甘露糖是正常的血漿成分。目前，血清甘露糖的測定方法主要有酶法、氣液色譜法、高分辨液相層析、氣液色譜-質譜法和毛細管電泳法等。但這些方法均存在一定的不足之處。比如，使用酶法、氣液色譜法和高分辨液相層析時，為避免高濃度的葡萄糖的影響需要將其去除，致使前處理過程比較繁瑣；氣液色譜-質譜法儀器價格昂貴，不適合常規目的；所需血清樣本量大。目前沒有文獻報道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜法同時檢測胃癌患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖。

發明內容

本發明的目的是提供了用于鑒定胃癌的生物標記物及其應用，本發明采用柱前PMP衍生的高效液相色譜法(HPLC)檢測胃癌患者血清中的單糖，尤其涉及血清中游離甘露糖和葡萄糖的檢測。本發明的技術方案可以用于檢測胃癌患者或正常人血清游離甘露糖和葡萄糖濃度，可以用于鑒定胃癌患者。

為實現本發明的目的，本發明通過以下技術方案予以實現：

用于鑒定胃癌的生物標記物，所述生物標記物為血清經過柱前PMP衍生的高效液相色譜得到的游離葡萄糖、游離甘露糖和葡萄糖與甘露糖濃度的比值(G/M濃度比)。

用于鑒定胃癌的生物標記物的定量分析方法，其特征在于：該方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法，包括以下具體步驟：

(1)調節pH為7-14：取待檢測的血清樣品加超純水于EP管中，加入氫氧化鈉，渦旋混勻；