[發(fā)明專利]一種鑒定胃癌生物標(biāo)記物的方法及其檢測試劑盒

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• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109342594A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張麗娟;單鳴;趙剛
• 申請（專利權(quán)）人: 青島大學(xué)附屬醫(yī)院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.用于鑒定胃癌的生物標(biāo)記物，其特征在于：所述生物標(biāo)記物為血清經(jīng)過柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜得到的游離葡萄糖、游離甘露糖及葡萄糖與甘露糖濃度的比值(G/M濃度比)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于鑒定胃癌的生物標(biāo)記物的定量分析方法，其特征在于：該方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法，包括以下具體步驟：

(1)調(diào)節(jié)pH為7-14：取待檢測的血清樣品加超純水于EP管中，加入氫氧化鈉，渦旋混勻；

(2)PMP衍生：每個樣品加入PMP，渦旋混勻，離心后置于烘箱反應(yīng)；

(3)加酸中和反應(yīng)：將烘箱內(nèi)的樣品取出，放置冷卻，每個樣品加入鹽酸，渦旋混勻；

(4)萃?。好抗芗尤胗袡C(jī)溶劑，渦旋，離心，移除下層有機(jī)溶劑，保留上清；

(5)將樣品離心，取上清液于裝有內(nèi)插管的棕色上樣瓶中，蓋緊蓋子，離心，待用于高效液相分析；

(6)制備甘露糖和葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

(7)將步驟(5)得到的色譜圖與步驟(6)的標(biāo)準(zhǔn)曲線比對并分析計(jì)算，確定甘露糖、葡萄糖的濃度以及G/M濃度比。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于鑒定胃癌的生物標(biāo)記物的定量分析方法，其特征在于：所述高效液相色譜為Agilent 1260高效液相系統(tǒng)，Agilent Poroshell EC-C18色譜柱(4.6mm×100mm，2.7μm)，所述步驟(5)中的色譜條件為：

檢測波長：254nm，帶寬4nm；

參比波長：350nm，帶寬100nm；

柱溫：37℃；

流速：1mL/min；

進(jìn)樣體積：20μL；

流動相：A相為乙腈，B相為pH為5.5的0.1mol/L乙酸銨-乙酸緩沖溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于鑒定胃癌的生物標(biāo)記物的定量分析方法，其特征在于：所述步驟(5)中流動相的梯度變化為：

0min，A相15％，B相85％；

10min，A相22％，B相78％；

15min，A相24％，B相76％；

15.1min，A相15％，B相85％；

20min，A相15％，B相85％。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于鑒定胃癌的生物標(biāo)記物的定量分析方法，其特征在于：所述步驟(3)中鹽酸的濃度為0.3mol/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于鑒定胃癌的生物標(biāo)記物的定量分析方法，其特征在于：所述步驟(4)中有機(jī)溶劑為三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和正己烷中的至少一種。

7.權(quán)利要求2-6所述的鑒定胃癌的生物標(biāo)記物的定量分析方法在胃癌疾病中的應(yīng)用，其特征在于所述血清樣品為胃癌患者的血清。

8.一種鑒定胃癌的試劑盒，其特征在于，該試劑盒含有權(quán)利要求1所述的生物標(biāo)記物，即血清經(jīng)過柱前PMP衍生的高效液相色譜得到的游離葡萄糖、游離甘露糖及G/M濃度比。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的鑒定胃癌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括濃度為5112μmol/L葡萄糖、59.65μmol/L甘露糖和G/M濃度比為62.59的標(biāo)準(zhǔn)液。

10.權(quán)利要求2-9任一項(xiàng)所述的試劑耗材在制備用于胃癌患者血清中葡萄糖、甘露糖和G/M濃度比定量的試劑盒中的用途。

11.一種鑒定胃癌的試劑盒，其特征在于通過血清中的葡萄糖、甘露糖和G/M濃度比定量鑒定胃癌。

12.權(quán)利要求8-11任一項(xiàng)所述的鑒定胃癌的試劑盒在體外檢測胃癌的用途。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于通過血清中的葡萄糖、甘露糖和G/M濃度比定量鑒定胃癌。