[發明專利]一種鑒定退行性骨關節病生物標記物的方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 201811323621.8
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109406662A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 張麗娟;李秀蓮;馬學曉
• 申請（專利權）人: 青島大學附屬醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種鑒定退行性骨關節病的生物標記物的方法及其檢測試劑盒。所述生物標記物為血清中經過柱前PMP衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和葡萄糖以及葡萄糖與甘露糖的比值。本發明檢測方法為柱前1?苯基?5?甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜法。本發明的技術方案具有前處理簡單，分析時間短，儀器價格合理，符合常規使用，操作步驟簡單易學，檢測結果準確性高，只需采血即可，并且所需血清量極少，采血量小于1mL等優點。所得結果顯示此分析方法可以快速定量退行性骨關節病患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖，對于研究血清游離甘露糖及葡萄糖與退行性骨關節病之間的關系、尋找新型退行性骨關節病臨床檢測標志物有著非常重要的意義。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種鑒定退行性骨關節病的生物標記物的方法及其檢測試劑盒。

背景技術

退行性骨關節病是一種慢性的，是由于人體的衰老以及關節長期磨損導致的骨關節發生退化的關節疾病，又稱骨關節炎、退行性關節炎，多見于中老年人群。該病的特征在于透明軟骨逐漸惡化伴隨著周圍組織的變化包括韌帶，滑膜和軟骨下骨，導致關節或脊柱受影響，隨著人口老齡化和預期壽命延長，骨關節疾病的負擔會越來越重，因此尋找一種早期診斷方法尤其重要。

對于退行性骨關節病臨床上主要靠一些癥狀和影像學的觀察，通常是疾病已經發生到很嚴重的程度了，但是臨床上用于診斷的血清標志物很少，目前還沒有完全確切的血清標志物單獨或聯合起來可以準確地用于這些疾病的早期診斷，或準確反應這些疾病預后評估治療情況，因此，尋找一種方便，無創傷的檢測方法是十分必要的。而最理想的早期檢測就是不需活檢，且靈敏性和特異性高的血液分析。

人體血清游離單糖中葡萄糖的含量最高，正常人的范圍為3.90～6.16mmol/L。目前，醫院檢驗科可以直接通過測生化指標檢測葡萄糖濃度，暫時不可以直接檢測甘露糖濃度。健康成人血漿中游離甘露糖的濃度范圍為20～80μmol/L。甘露糖的含量約為葡萄糖含量的1％。它大部分被認為是由細胞中的葡萄糖異構化而來。而近來有研究表明，細胞中流出的游離的甘露糖是哺乳動物血液中游離甘露糖的主要來源。這兩部分來源的游離甘露糖維持著血清中甘露糖的穩定。D-甘露糖是糖蛋白，細胞表面糖綴合物和糖基化磷脂酰肌醇錨定蛋白等結構中必需的單糖。其中，甘露糖是各種多糖復合物中N-糖鏈的重要組分，N-聚糖中的甘露糖殘基來源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游離甘露糖是正常的血漿成分。目前，血清甘露糖的測定方法主要有酶法、氣液色譜法、高分辨液相層析、氣液色譜-質譜法和毛細管電泳法等。但這些方法均存在一定的不足之處。比如，使用酶法、氣液色譜法和高分辨液相層析時，為避免高濃度的葡萄糖的影響需要將其去除，致使前處理過程比較繁瑣；氣液色譜-質譜法儀器價格昂貴，不適合常規目的；所需血清樣本量大。目前沒有文獻報道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜法同時檢測退行性骨關節病患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖。

發明內容

本發明的目的是提供了用于鑒定退行性骨關節病的生物標記物及其應用，本發明采用柱前PMP衍生的高效液相色譜法(HPLC)檢測退行性骨關節病患者血清中的單糖，尤其涉及血清中游離甘露糖和葡萄糖的檢測。本發明的技術方案可以用于檢測退行性骨關節病患者或正常人血清游離甘露糖和葡萄糖濃度，可以用于鑒定退行性骨關節病患者。

為實現本發明的目的，本發明通過以下技術方案予以實現：

用于鑒定退行性骨關節病的生物標記物，所述生物標記物為血清經過柱前PMP衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和葡萄糖。

用于鑒定退行性骨關節病的生物標記物的定量分析方法，其特征在于：該方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法，包括以下具體步驟：

(1)調節pH為7-14：取待檢測的血清樣品加超純水于EP管中，加入氫氧化鈉，渦旋混勻；

(2)PMP衍生：每個樣品加入PMP，渦旋混勻，離心后置于烘箱反應；