[發明專利]一種鑒定退行性骨關節病生物標記物的方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 201811323621.8
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109406662A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 張麗娟;李秀蓮;馬學曉
• 申請（專利權）人: 青島大學附屬醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.用于鑒定退行性骨關節病的生物標記物，其特征在于：所述生物標記物為血清經過柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和葡萄糖以及葡萄糖與甘露糖的比值。

2.根據權利要求1所述的用于鑒定退行性骨關節病的生物標記物的定量分析方法，其特征在于：該方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法，包括以下具體步驟：

(1)調節pH為7-14：取待檢測的血清樣品加超純水于EP管中，加入氫氧化鈉，渦旋混勻；

(2)PMP衍生：每個樣品加入PMP，渦旋混勻，離心后置于烘箱反應；

(3)加酸中和反應：將烘箱內的樣品取出，放置冷卻，每個樣品加入鹽酸，渦旋混勻；

(4)萃取：每管加入有機溶劑，渦旋，離心，移除下層有機溶劑，保留上清；

(5)將樣品離心，取上清液于裝有內插管的棕色上樣瓶中，蓋緊蓋子，離心，待用于高效液相分析；

(6)制備甘露糖和葡萄糖的標準曲線；

(7)將步驟(5)得到的色譜圖與步驟(6)的標準曲線比對并分析計算，確定甘露糖、葡萄糖的濃度以及葡萄糖與甘露糖濃度的比值。

3.根據權利要求2所述的用于鑒定退行性骨關節病的生物標記物的定量分析方法，其特征在于：所述高效液相色譜為Agilent 1260高效液相系統，Agilent Poroshell EC-C18色譜柱(4.6mm×100mm，2.7μm)，所述步驟(5)中的色譜條件為：

檢測波長：254nm，帶寬4nm；

參比波長：350nm，帶寬100nm；

柱溫：37℃；

流速：1mL/min；

進樣體積：20μL；

流動相：A相為乙腈，B相為pH為5.5的0.1mol/L乙酸銨-乙酸緩沖溶液。

4.根據權利要求3所述的用于鑒定退行性骨關節病的生物標記物的定量分析方法，其特征在于：所述步驟(5)中流動相的梯度變化為：

0min，A相15％，B相85％；

10min，A相22％，B相78％；

15min，A相24％，B相76％；

15.1min，A相15％，B相85％；

20min，A相15％，B相85％。

5.根據權利要求2所述的用于鑒定退行性骨關節病的生物標記物的定量分析方法，其特征在于：所述步驟(3)中鹽酸的濃度為0.3mol/L。

6.根據權利要求2所述的用于鑒定退行性骨關節病的生物標記物的定量分析方法，其特征在于：所述步驟(4)中有機溶劑為三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和正己烷中的至少一種。

7.權利要求2-6所述的鑒定退行性骨關節病的生物標記物的定量分析方法在退行性骨關節病疾病中的應用，其特征在于所述血清樣品為退行性骨關節病患者的血清。

8.一種鑒定退行性骨關節病的試劑盒，其特征在于，該試劑盒含有權利要求1所述的生物標記物，即血清經過柱前PMP衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和葡萄糖以及葡萄糖與甘露糖的比值。

9.根據權利要求8所述的鑒定退行性骨關節病的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括葡萄糖與甘露糖濃度的比值為59.33的標準液。

10.權利要求2-9任一項所述的試劑耗材在制備用于退行性骨關節病患者血清中甘露糖和葡萄糖定量的試劑盒中的用途。

11.一種鑒定退行性骨關節病的試劑盒，其特征在于通過血清中的甘露糖和葡萄糖定量鑒定退行性骨關節病。

12.權利要求8-11任一項所述的鑒定退行性骨關節病的試劑盒在體外檢測退行性骨關節病的用途。

13.根據權利要求12所述的用途，其特征在于通過血清中的甘露糖和葡萄糖定量鑒定退行性骨關節病。