[發明專利]一種5’‐肌苷酸二鈉和5’‐鳥苷酸二鈉在線濃度檢測方法

有效

• 申請號: 201811323223.6
• 申請日: 2018-11-08
• 公開（公告）號: CN109520954B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發明（設計）人: 江燕斌;李炳輝;宋陽;孫良杰
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 向玉芳

1.一種5’-肌苷酸二鈉和5’-鳥苷酸二鈉在線濃度檢測方法，其特征在于包括如下步驟：

1)獲取標定數據：根據實際應用過程中待測IMP和GMP混合溶液的IMP和GMP溶液濃度、待測溶液溫度以及乙醇濃度的變化范圍，分別設定檢測模型中IMP濃度、GMP濃度、待測溶液溫度及乙醇濃度的上限和下限設計標定實驗；依次配制標定實驗中溫度下已知IMP濃度、GMP濃度及乙醇濃度的混合溶液作為標樣；先將基于ATR-UV的5’-肌苷酸二鈉和5’-鳥苷酸二鈉在線濃度檢測裝置的ATR探頭浸入純水中，測量參比ATR-UV計數譜圖，記錄并保存；然后將ATR探頭及測溫熱電阻直接依次浸入每個標樣中，獲取每個標樣5-20個平行重復的ATR-UV計數譜圖和溶液溫度，作為每個標樣的標定數據，采集所有標樣的標定數據；對標定數據依次進行基線校正、平滑、剔除異常點及平均處理；

所述的對標定數據依次進行基線校正、平滑、剔除異常點及平均處理是指在IMP和GMP吸收光譜的紫外光區沒有吸收的任一波長κ處，取該波長處標樣的ATR-UV計數譜圖S與在純水中測得的參比ATR-UV計數譜圖S^ref的計數值S_κ與求取校正因子然后對標樣的ATR-UV計數譜圖S除以校正因子a，再聯合純水下測得的參比ATR-UV計數譜圖S^ref求得標樣的ATR-UV吸收光譜A＝lgS^ref-(lgS)/a；然后對標樣的ATR-UV吸收光譜A進行平滑降噪處理，得到最終處理后的計算用的標樣的ATR-UV吸收光譜A^cal；利用馬氏距離剔除異常數據：對每個標樣的5～20個標定數據，計算其距離均值的馬氏距離，剔除馬氏距離大于閾值的數據，對每個標樣剩余的標定數據進行算術平均處理，以此類推依次處理所有標樣的標定數據；

2)確定回歸模型：將處理后的標定數據組合成為標定矩陣，標定矩陣的行對應于每一個標樣處理后的標定數據，每一列分別對應于標定數據的IMP溶液濃度c_IMP、GMP溶液濃度c_GMP、乙醇濃度c_EtOH、溶液溫度T和ATR-UV吸收光譜A^cal 230～310nm波長范圍n個波長處的吸光度值R_i，n大于等于2；利用偏最小二乘法對標定矩陣進行回歸，獲得檢測模型和的關聯系數；其中α_i,IMP和α_i,GMP分別為IMP和GMP光譜項的系數，β_IMP和β_GMP分別為IMP和GMP乙醇濃度項的關聯系數、γ_IMP和γ_GMP分別為IMP和GMP溶液溫度項的關聯系數，ε_IMP和ε_GMP分別為IMP和GMP的常數項關聯系數；i為從1到n的整數；

3)在線濃度測量：在結晶釜中，通過直接安裝在結晶釜中的帶有ATR探頭的光譜儀和測溫熱電阻實時獲取待測溶液ATR-UV計數譜圖和溶液溫度；對于乙醇濃度恒定不變的過程，實時乙醇濃度由初始結晶釜投料時已知給定；對于以乙醇作反溶劑的反溶劑結晶過程，實時乙醇濃度由控制電腦控制計量泵流加速率和時間計算獲得；實時獲取的待測溶液ATR-UV計數譜圖，經過步驟1)中的基線校正、平滑處理，得到處理后的待測溶液ATR-UV吸收光譜；將待測溶液ATR-UV吸收光譜230～310nm波長范圍n個波長處的吸光度值R_i，與對應的乙醇濃度c_EtOH和溶液溫度T信息，代入檢測模型和中，計算檢測模型因變量，獲得IMP及GMP的溶液濃度。

2.根據權利要求1所述的5’-肌苷酸二鈉和5’-鳥苷酸二鈉在線濃度檢測方法，其特征在于，所述的閾值是指標定數據馬氏距離的均值+1.5×標定數據馬氏距離的標準差。

3.根據權利要求1所述的5’-肌苷酸二鈉和5’-鳥苷酸二鈉在線濃度檢測方法，其特征在于，所述的計數譜圖是入射光不同波長處的光強轉換成的計數值組成的譜圖，計數值是光強的相對值。

4.根據權利要求1所述的5’-肌苷酸二鈉和5’-鳥苷酸二鈉在線濃度檢測方法，其特征在于，步驟1)所述的純水溫度為20～40℃。