[發(fā)明專利]嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-NKp44及其用途

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• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109467605A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王恩秀;汪晨;武國英
• 申請（專利權(quán)）人: 南京卡提醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 談杰

1.一種嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-NKp44，其特征在于，所述嵌合抗原受體由胞內(nèi)第二傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域DAP12、T2A、CD8α信號肽、抗人MSLN單克隆抗體ss1輕鏈和重鏈可變區(qū)MSLN scFv、胞內(nèi)第一傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域NKp44串聯(lián)構(gòu)成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-NKp44，其特征在于，所述嵌合抗原受體含有針對人MSLN抗原的單鏈抗體MSLN scFv，其核酸序列如SEQ IDNO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，或與其具有85％-99％同一性的氨基酸序列；所述單鏈抗體的輕鏈可變區(qū)(VL)和重鏈可變區(qū)(VH)之間由連接肽(Linker)連接，包含GSLinker如(G₃S)₄或(G₄S)₃等，優(yōu)選GGGGSGGGGSSGGGS連接肽。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-NKp44，其特征在于，第二傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域DAP12通過T2A與胞外信號肽和抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域串聯(lián)；優(yōu)選的，所述DAP12核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，或與其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽；所述T2A核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，氨基酸序列如SEQID NO.6所示，或與其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-NKp44，其特征在于，胞外信號肽選自核苷酸如SEQ ID NO.7所示的CD8α信號肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，或與其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽；胞內(nèi)第一傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域選自核苷酸如SEQ ID NO.9所示的NKp44，NKp44氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，或與其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽。

5.一種編碼如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的靶向MSLN嵌合抗原受體的核酸。其特征在于，所述嵌合抗原受體的核酸序列如SEQ ID NO.16所示；所述嵌合抗原受體的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.20所示，或與其具有85％-99％同一性的氨基酸序列。

6.一種重組表達(dá)載體，其特征在于包含權(quán)利要求5所述的核酸分子。

7.一種制備權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體修飾的T細(xì)胞的方法，其特征在于該方法包括分離和激活待修飾的T細(xì)胞，然后以權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)導(dǎo)該T細(xì)胞。

8.一種如權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)載體的嵌合抗原受體的細(xì)胞；其特征在于所述的細(xì)胞選自免疫細(xì)胞；所述的細(xì)胞選自T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞、多能干細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)分化的免疫細(xì)胞。

9.一種藥物組合物，其特征在于包含有效量的權(quán)利要求8中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞和藥學(xué)上可接受的載體。

10.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的靶向MSLN嵌合抗原受體，權(quán)利要求5中任一項(xiàng)所述的核酸，權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)載體以及權(quán)利要求8所述的宿主細(xì)胞在制備哺乳動物腫瘤治療藥物中的應(yīng)用；優(yōu)選在制備惡性實(shí)體腫瘤治療藥物中的應(yīng)用。