[發(fā)明專利]基于APOA4蛋白胃癌檢測(cè)試劑盒、及其使用方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811319452.0
• 申請(qǐng)日: 2018-11-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109212218A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李玉民;趙陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 李玉民
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/58;G01N33/535
• 代理公司: 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220
• 代理人: 胡曉麗

本發(fā)明公開(kāi)了基于APOA4蛋白胃癌檢測(cè)試劑盒，所述檢測(cè)試劑盒的組成包括：溶液A：采用抗體稀釋液將Human APOA4蛋白稀釋成工作溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品；溶液B：采用生物素檢測(cè)抗體稀釋液將濃縮生物素檢測(cè)抗體稀釋成工作溶液，所述濃縮生物素檢測(cè)抗體采用鼠抗人AMY1A單克隆抗體；溶液C：采用HPR共軛稀釋劑將濃縮HRP結(jié)合物稀釋成工作溶液；溶液D：采用抗體稀釋液將兔抗人AMY1A多克隆抗體稀釋成工作溶液；溶液E：Wash Buffer；溶液F：顯色液；溶液G：終止液。本發(fā)明采用ELISA法檢測(cè)將所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測(cè)試劑盒用于檢測(cè)血清中APOA4蛋白表達(dá)水平，成本較低，操作方便，利于基層推廣普及應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于APOA4蛋白胃癌檢測(cè)試劑盒、及其使用方法。

背景技術(shù)

胃癌(Gastric Cancer)是世界上發(fā)病率最高的腫瘤之一，如何提高胃癌患者的早診早治是目前國(guó)內(nèi)研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。因?yàn)樵缙谖赴](méi)有明顯的臨床表現(xiàn)，胃癌的早期臨床表現(xiàn)也常常與胃炎相混淆，所以大多數(shù)胃癌患者即使腫瘤發(fā)展至進(jìn)展期或者晚期，也沒(méi)有特異性臨床癥狀出現(xiàn)，因而依靠臨床表現(xiàn)診斷胃癌顯然無(wú)法實(shí)現(xiàn)。雖然胃鏡篩查已經(jīng)成為中年以上人群的體檢項(xiàng)目，但由于是侵入性檢查方法，普通民眾接受度不高，另檢查設(shè)備成本較高在基層普及具有一定的困難。一些常規(guī)的檢測(cè)指標(biāo)諸如CEA、CA199和CA724等用于消化道腫瘤檢測(cè)的腫瘤標(biāo)志性蛋白質(zhì)，也由于在普通人群中篩查的敏感性和特異性均不高的原因只能用于部分胃癌患者的術(shù)后復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)。目前尋找特異性腫瘤標(biāo)記物，尤其是在外周血中尋找對(duì)于胃癌有明確特異性的標(biāo)志性蛋白質(zhì)分子具有很高的臨床價(jià)值。

APOA4基因編碼載脂蛋白A-IV，該蛋白經(jīng)水解、糖基化后生成酸性糖蛋白，主要存在于乳糜微粒(CM)、極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)中。在血脂運(yùn)輸和代謝，特別是在膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中起重要作用。

國(guó)內(nèi)外的眾多研究表明，APOA4基因上的多態(tài)現(xiàn)象與血糖、血漿脂蛋白、膽固醇以及甘油三酯等的水平相關(guān)。APOA4基因的缺陷可直接導(dǎo)致血漿中的載脂蛋白A-IV水平的下降或活性的改變，其他一些脂蛋白和膽固醇的水平相應(yīng)升高，從而大大提高罹患高脂蛋白血癥和冠心病的風(fēng)險(xiǎn)。另外，也有研究發(fā)現(xiàn)APOA4基因和阿爾茨海默氏癥也存在著一定的關(guān)系。

基因結(jié)構(gòu)：APOA4全稱Apolipoprotein A-IV(載脂蛋白A-IV)，位于第11號(hào)染色體11q23位置，與APOA1及APOC3基因連鎖。該基因全長(zhǎng)2,603bp,共有3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子。mRNA全長(zhǎng)1,460nt，編碼由396個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白。

生物學(xué)功能：載脂蛋白A-IV(apoA-IV)是一種酸性糖蛋白，分子量46kD。它是血漿脂蛋白家族中最常見(jiàn)的成員，具有多種調(diào)節(jié)脂蛋白代謝的功能。apoA-IV在人類和嚙齒類動(dòng)物腸道中廣泛存在，主要由小腸和肝臟分泌。在哺乳動(dòng)物中，apoA-IV主要是由小腸絨毛上皮細(xì)胞在吸收脂肪時(shí)合成，然后結(jié)合在乳糜微粒表面，隨之進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。因此apoA-IV合成和分泌受乳糜微粒合成、瘦素、高脂飲食等多種因素的影響。

雖然有大量研究揭示了apoA-IV眾多生理功能，但其確切作用機(jī)制尚不清楚，目前公認(rèn)的生理生化功能有：

1)激活卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)，催化游離膽固醇轉(zhuǎn)變?yōu)槟懝檀减ィ瑓⑴cHDL的成熟過(guò)程。Steinmetz等人的體外實(shí)驗(yàn)證明了apoA-IV同apoA-I類似都能激活LCAT，其激活效率與底物有關(guān)；

2)輔助apoC-Ⅱ激活脂蛋白脂酶(LPL)，LPL能水解血漿CM和VLDL中的甘油三酯，因此也參與外源性脂肪的吸收。Goldbery等人的實(shí)驗(yàn)證明只有在apoA-Ⅱ存在的條件下，apoA-IV能提高LPL活性，而apoA-I、apoE、CETP則無(wú)此作用；