[發明專利]基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒、及其使用方法在審
| 申請號： | 201811319452.0 | 申請日： | 2018-11-07 |
| 公開（公告）號： | CN109212218A | 公開（公告）日： | 2019-01-15 |
| 發明（設計）人： | 李玉民;趙陽 | 申請（專利權）人： | 李玉民 |
| 主分類號： | G01N33/574 | 分類號： | G01N33/574;G01N33/58;G01N33/535 |
| 代理公司： | 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220 | 代理人： | 胡曉麗 |
| 地址： | 730000 甘肅省*** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 工作溶液 稀釋 檢測抗體 胃癌檢測 試劑盒 蛋白 抗體稀釋液 濃縮生物 稀釋劑 蛋白表達水平 單克隆抗體 多克隆抗體 檢測試劑 標準品 結合物 生物素 稀釋液 顯色液 終止液 檢測 血清 共軛 鼠抗 兔抗 濃縮 應用 基層 | ||
1.基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒的組成包括：
溶液A：采用抗體稀釋液將Human APOA4蛋白稀釋成工作溶液，作為標準品；
溶液B：采用生物素檢測抗體稀釋液將濃縮生物素檢測抗體稀釋成工作溶液，所述濃縮生物素檢測抗體采用鼠抗人AMY1A單克隆抗體；
溶液C：采用HPR共軛稀釋劑將濃縮HRP結合物稀釋成工作溶液；
溶液D：采用抗體稀釋液將兔抗人AMY1A多克隆抗體稀釋成工作溶液；
溶液E：Wash Buffer；
溶液F：顯色液；
溶液G：終止液。
2.根據權利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液A中，Human APOA4蛋白濃度為300ng/mL。
3.根據權利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液B中，將濃縮生物素檢測抗體100倍稀釋成工作溶液。
4.根據權利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液C中，將濃縮HRP結合物100倍稀釋成工作溶液。
5.根據權利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液D中，AMY1A抗體濃度為0.1ug/mL～5ug/mL。
6.根據權利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液E中，用ddH2O將Wash Buffer 25倍稀釋成工作溶液。
7.根據權利要求1-6任一項所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，采用ELISA法檢測將所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒用于檢測血清中APOA4蛋白表達水平。
8.根據權利要求7所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步驟：
步驟1，取兔抗人AMY1A多克隆抗體用抗體稀釋液稀釋成工作溶液D，以50uL/孔加入96孔板中，保持4℃溫度條件下靜置；
步驟2，去上清液，以350uL/孔加入Wash Buffer，放置1～2min，去上清液，反復清洗，去上清液；
步驟3，每孔加入100uL標準品或者樣品，于37℃孵育90min；
步驟4，采用步驟2的方法清洗，以100μL/孔加入工作溶液B，于37℃孵育1h；
步驟5，采用步驟2的方法清洗，以100μL/孔加入工作溶液C，于37℃孵育30min；
步驟6，采用步驟2的方法清洗，以90μL/孔加入顯色液，于37℃顯色15min；
步驟7，以50μL/孔加入終止液；
步驟8，用酶標儀測量450nm處的吸光度值。
9.根據權利要求8所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟3中使用的樣品為采集的外周血清采用PBS稀釋100倍～150倍制備獲得。
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