[發(fā)明專利]基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒、及其使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811319452.0
• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109212218A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李玉民;趙陽
• 申請（專利權(quán)）人: 李玉民
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/58;G01N33/535
• 代理公司: 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220
• 代理人: 胡曉麗

1.基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒的組成包括：

溶液A：采用抗體稀釋液將Human APOA4蛋白稀釋成工作溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品；

溶液B：采用生物素檢測抗體稀釋液將濃縮生物素檢測抗體稀釋成工作溶液，所述濃縮生物素檢測抗體采用鼠抗人AMY1A單克隆抗體；

溶液C：采用HPR共軛稀釋劑將濃縮HRP結(jié)合物稀釋成工作溶液；

溶液D：采用抗體稀釋液將兔抗人AMY1A多克隆抗體稀釋成工作溶液；

溶液E：Wash Buffer；

溶液F：顯色液；

溶液G：終止液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液A中，Human APOA4蛋白濃度為300ng/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液B中，將濃縮生物素檢測抗體100倍稀釋成工作溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液C中，將濃縮HRP結(jié)合物100倍稀釋成工作溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液D中，AMY1A抗體濃度為0.1ug/mL～5ug/mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒，其特征在于，所述溶液E中，用ddH₂O將Wash Buffer 25倍稀釋成工作溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，采用ELISA法檢測將所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒用于檢測血清中APOA4蛋白表達(dá)水平。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步驟：

步驟1，取兔抗人AMY1A多克隆抗體用抗體稀釋液稀釋成工作溶液D，以50uL/孔加入96孔板中，保持4℃溫度條件下靜置；

步驟2，去上清液，以350uL/孔加入Wash Buffer，放置1～2min，去上清液，反復(fù)清洗，去上清液；

步驟3，每孔加入100uL標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品，于37℃孵育90min；

步驟4，采用步驟2的方法清洗，以100μL/孔加入工作溶液B，于37℃孵育1h；

步驟5，采用步驟2的方法清洗，以100μL/孔加入工作溶液C，于37℃孵育30min；

步驟6，采用步驟2的方法清洗，以90μL/孔加入顯色液，于37℃顯色15min；

步驟7，以50μL/孔加入終止液；

步驟8，用酶標(biāo)儀測量450nm處的吸光度值。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的基于APOA4蛋白胃癌檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟3中使用的樣品為采集的外周血清采用PBS稀釋100倍～150倍制備獲得。