[發(fā)明專利]生產(chǎn)抗體片段的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811318557.4
• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109943572B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 史家海;陳荔;危立坤;馮麗敏
• 申請（專利權(quán)）人: 香港城市大學
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C12N15/70;C07K16/00
• 代理公司: 北京潤平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283
• 代理人: 喬雪微;劉依云

1.一種生產(chǎn)目標抗原抗體片段的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a)至少兩次將包含所述目標抗原的免疫混合物施予來自斑竹屬(Chiloscyllium)的竹鯊；

b)從所述竹鯊采集血液樣本；

c)從所述血液樣本中提取RNA；

d)對所述RNA進行逆轉(zhuǎn)錄以獲得cDNA，并且將所述cDNA擴增以獲得擴增的cDNA的混合物，然后將其純化，其中，所述cDNA通過使用至少一個引子組而擴增，所述引子組選自由以下組成的組中：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的組，以及SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的組；

e)將在所述步驟d)中獲得的所述cDNA插入到載體以生成重組質(zhì)粒；

f)利用酒精和鹽通過沉淀純化所述重組質(zhì)粒，并將所述重組質(zhì)粒引入細菌細胞以形成重組細胞；和

g)培養(yǎng)所述重組細胞并且從所述培養(yǎng)的重組細胞提取所述抗體片段。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述竹鯊是點紋斑竹鯊(Chiloscylliumpunctatum)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫混合物包括所述目標抗原和弗氏佐劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步驟a)中，每個月一次將所述免疫混合物施予所述竹鯊，持續(xù)至少三個月。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗體片段是單域抗體。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述重組質(zhì)粒包括緊密素域。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步驟e)中，所述cDNA和所述載體的摩爾比是9:1。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述細菌細胞是大腸桿菌細胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述目標抗原是熒光分子或有機染料。

10.一種從來自斑竹屬(Chiloscyllium)的竹鯊生產(chǎn)目標抗原的抗體片段的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a)至少兩次將包含所述目標抗原的免疫混合物施予所述竹鯊，其中，所述目標抗原是熒光分子或有機染料；

b)從所述竹鯊采集血液樣本；

c)從所述血液樣本提取RNA；以及

d)對所述RNA進行逆轉(zhuǎn)錄以獲得cDNA，并且擴增所述cDNA以獲得擴增cDNA的混合物，然后將其純化，其中，所述cDNA通過使用至少一個引子組而擴增，所述引子組包括選自由以下組成的組中：SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4的組，以及SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8的組。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述竹鯊是點紋斑竹鯊(Chiloscylliumpunctatum)。

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，每個月一次將所述免疫混合物施予所述竹鯊，持續(xù)至少三個月。

13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述免疫混合物包括所述目標抗原和弗氏佐劑。

14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述目標抗原是綠色熒光蛋白。

15.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，還包括將所述cDNA插入到載體以形成重組質(zhì)粒的步驟，其中所述重組質(zhì)粒包括緊密素域；并且將所述重組質(zhì)粒引入大腸桿菌細胞以形成重組細胞。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，還包括培養(yǎng)所述重組細胞并且提取所述抗體片段的步驟。