[發明專利]一種完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法在審
| 申請號： | 201811316666.2 | 申請日： | 2018-11-07 |
| 公開（公告）號： | CN109384841A | 公開（公告）日： | 2019-02-26 |
| 發明（設計）人： | 徐彬;樊廷俊;姜國建 | 申請（專利權）人： | 中國海洋大學 |
| 主分類號： | C07K14/78 | 分類號： | C07K14/78;C07K1/14;C12P21/06;A61L27/24;A61L17/10;A61L15/32 |
| 代理公司： | 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201 | 代理人： | 張中南 |
| 地址： | 266100 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 膠原蛋白 溶解液 上清液 溶解 牛膠原 肽鏈 蛋白 析出 離心收集 析出液 膠原蛋白酶解液 預處理 敷料 離心收集沉淀 醫用生物材料 組織工程載體 非膠原蛋白 手術縫合線 低溫條件 去除液 補加 跟腱 護創 酶解 透析 勻漿 支架 制備 沉淀 保存 生產 重復 應用 | ||
1.一種牛膠原蛋白，其特征是該牛膠原蛋白具有完整肽鏈，且分子量與天然膠原蛋白分子一致，純度達到98%以上，凍干后呈白色、海綿狀。
2.完整肽鏈牛膠原蛋白生產的方法：牛跟腱的預處理，之后均在4℃條件下進行操作：首先去除碎塊中的非膠原蛋白、再用膠原蛋白溶解液溶解碎塊中的膠原蛋白、析出膠原蛋白、再溶解膠原蛋白，再析出膠原蛋白，之后透析，最后冷凍干燥后保存。
3.一種完整肽鏈牛膠原蛋白的具體制備步驟，其特征是
1）首先將新鮮牛跟腱洗凈后切成碎塊，在低溫條件下進行提取，用非膠原蛋白去除液處理牛跟腱碎塊，再用蒸餾水洗滌至pH為中性；
2）然后用膠原蛋白溶解液溶解上述處理的牛跟腱碎塊，并進行充分勻漿后補加膠原蛋白溶解液繼續溶解膠原蛋白，再添加膠原蛋白酶解液進行適當酶解，離心后收集上清液，之后加入膠原蛋白析出液使膠原蛋白析出，離心后收集沉淀物；
4）重復步驟2），省掉其中的勻漿工藝；
5）用膠原蛋白溶解液溶解收集沉淀物，最后將上清液進行透析，即得完整肽鏈結構的膠原蛋白，冷凍干燥后保存。
4.如權利要求3所述的完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法，其特征是上述非膠原蛋白去除液是：含有0.5~2 mol/L NaCl的0.05 mol/L Tris-HCl溶液，pH為7.4。
5.如權利要求3所述的完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法，其特征是上述膠原蛋白溶解液是0.3~0.6 mol/L醋酸溶液。
6.如權利要求3所述的完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法，上述膠原蛋白酶解液是含有1~2 mg/mL胃蛋白酶的膠原蛋白溶解液，其中胃蛋白酶酶活為3000~3500 NF U/mg。
7.如權利要求3所述的完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法，其特征是上述膠原蛋白析出液是10~20%（W/V）NaOH溶液。
8.如權利要求3所述的完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法，其特征是上述加入膠原蛋白析出液使膠原蛋白析出的方法：逐滴滴加膠原蛋白析出液調pH至7.3，邊滴加邊攪拌使膠原析出，靜置過夜。
9.權利要求1的牛膠原蛋白作為醫用生物材料應用于組織工程載體支架、手術縫合線和護創敷料的制備。
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