[發明專利]一種完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法

在審

• 申請號: 201811316666.2
• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109384841A
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 徐彬;樊廷俊;姜國建
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/14;C12P21/06;A61L27/24;A61L17/10;A61L15/32
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 張中南

一種完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法。其特征是將牛跟腱預處理之后均在低溫條件下進行操作：首先用非膠原蛋白去除液處理，后用膠原蛋白溶解液進行溶解，并進行充分勻漿后補加膠原蛋白溶解液繼續溶解膠原蛋白，再添加膠原蛋白酶解液進行酶解，離心后收集上清液，之后加入膠原蛋白析出液使膠原蛋白析出，離心后收集沉淀，重復上述膠原蛋白溶解液溶解膠原蛋白?離心收集上清液?膠原蛋白析出液析出膠原蛋白?離心收集沉淀?膠原蛋白溶解液溶解?離心收集上清液的處理步驟，最后將上清液進行透析，即得完整肽鏈牛膠原蛋白，冷凍干燥后保存?？勺鳛獒t用生物材料應用于組織工程載體支架、手術縫合線、護創敷料等的制備。

技術領域

本發明屬于醫用生物材料，具體涉及一種完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法。

背景技術

膠原蛋白作為一種天然的生物大分子物質，因其具有良好的生物相容性、可降解性以及創傷修復、止血、抗輻射、抗衰老等生物活性，已廣泛應用于食品、生物醫藥和化妝品等領域。目前，膠原蛋白提取主要來源于動物的骨骼，但動物骨骼中含有大量無機物，因此利用動物骨骼提取膠原蛋白工藝繁瑣、得率較低，尤其是通過高溫聯合酶處理法獲得的膠原蛋白，其肽鏈將出現不同程度降解，即得到的膠原蛋白不具備完整的肽鏈；而已有技術利用堿提取法容易引起膠原蛋白的變性，嚴重水解時甚至會導致膠原蛋白發生消旋而產生有毒物質。此外，已有商業化的基因重組膠原蛋白價格十分昂貴，售價在每克約10萬人民幣，且這種重組膠原蛋白的肽鏈也同樣出現不同程度的降解，只能用于包被細胞生長的介質，從而促進細胞的貼附，而這些不完整肽鏈的膠原蛋白是無法滿足膠原蛋白在醫用生物材料、尤其是在組織工程載體支架制備中實際應用的需要的，更不能進行規模化的生產。因此，必須盡快建立完善的完整肽鏈膠原蛋白的生產工藝，并實現規?；纳a，以高質低價滿足醫用生物材料的需要。

發明內容

本發明的目的是提供一種完整肽鏈膠原蛋白的生產方法，以克服現有技術的不足，并實現規模化的生產。

鑒于已有技術的膠原蛋白為了追求低廉的價格，其提取原料主要來源于動物的骨骼，但是又存在方法不當，提取步驟繁瑣，提取質量和效率低、以及應用范圍小等諸多弊端。如已有技術在提取膠原蛋白的過程中，往往使用熱源處理，如熱水抽提、噴霧干燥等，難以保證所提取的膠原蛋白為完整肽鏈的結構，因此不能保證提取的膠原蛋白保持最佳生物活性。

本發明為了克服傳統工藝在提取過程中對膠原蛋白結構及其活性破壞的弊端，建立完善的完整肽鏈牛膠原蛋白的生產方法，實現規?；纳a，采用以膠原蛋白尤為豐富的新鮮牛跟腱為原材料，并以工藝全程4℃低溫條件下進行，其中利用醋酸溶解、酶解等手段制出完整肽鏈牛膠原蛋白。

本發明制成的完整肽鏈牛膠原蛋白的分子量與天然膠原蛋白分子一致，純度達到98%以上，凍干后呈白色、海綿狀。

本發明的生產方法：先將牛跟腱清洗切碎進行牛跟腱的預處理，之后均在4℃條件下進行操作：首先去除碎塊中的非膠原蛋白、再用膠原蛋白溶解液溶解碎塊中的膠原蛋白、析出膠原蛋白、再溶解膠原蛋白，再析出膠原蛋白，之后透析，最后冷凍干燥后保存。

本發明的完整肽鏈牛膠原蛋白的具體制作步驟，其特征是

1、首先將新鮮牛跟腱去除筋膜、脂肪、血管，再清洗干凈并瀝干水后切成碎塊；以下操作均在4℃條件下進行：

2、用30倍體積（V/W）的非膠原蛋白去除液浸泡并不斷攪拌24~48 h，期間每8~12 h更換一次溶液，之后棄去上清液，用蒸餾水洗滌至pH為中性，用2層紗布瀝去水分；

3、然后加入10倍體積（V/W）的膠原蛋白溶解液，浸泡攪拌12~24 h后，將攪拌混合液放入勻漿器中充分勻漿；