[發明專利]一種桑葉活性物質的提取方法

在審

• 申請號: 201811316419.2
• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109627350A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發明（設計）人: 李健
• 申請（專利權）人: 蘭溪市哥特生物技術有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 北京國翰知識產權代理事務所(普通合伙) 11696
• 代理人: 呂彩霞

1.一種桑葉活性物質的提取方法，包括桑葉脫脂預處理、超聲波輔助提取、脫蛋白、大孔吸附樹脂D301G處理、超濾和真空冷凍干燥，其特征在于：所述脫蛋白步驟為：在桑葉提取液中加入DMSO和PVP，然后采用凍融循環處理技術脫除桑葉提取液中的蛋白質雜質。

2.根據權利要求1所述的一種桑葉活性物質的提取方法，其特征在于：所述脫蛋白的具體步驟為：

1)凍融：在桑葉提取液中加入重量比為0.5-1.5％的含水量為20％的DMSO和重量比為1.5-2.5％的PVP，于-10～-20℃下冷凍貯藏80-100h；達到冷凍貯藏時間后，將凍結的桑葉提取液于4-10℃恒溫環境中自然解凍；

2)凍融循環：將步驟1)中的解凍液重復凍融循環處理3-5次；

3)沉淀分離：完成步驟2)凍融循環處理的解凍液，于3000-4000rpm下離心40-45min，收集上清液；上清液經0.45-0.60μm水系濾膜過濾分離，收集濾液得脫蛋白桑葉提取液。

3.根據權利要求1所述的一種桑葉活性物質的提取方法，其特征在于：所述桑葉脫脂預處理步驟為：將桑葉洗凈，置于60-95％乙醇溶液中浸泡16-24h，干燥，粉碎，過40-50目篩，陰涼處風干得桑葉干粉。

4.根據權利要求3所述的一種桑葉活性物質的提取方法，其特征在于：所述乙醇溶液中含有0.3-0.5％的PVP和0.1-0.3％的苦馬豆素。

5.根據權利要求1所述的一種桑葉活性物質的提取方法，其特征在于：所述超聲波輔助提取步驟為：將桑葉粉與水溶液按比例W/V為1:6-14混合均勻，超聲輔助提取，離心收集上清液，重復提取2-3次，合并所有的上清液充分混合后得桑葉提取液。

6.根據權利要求5所述的一種桑葉活性物質的提取方法，其特征在于：所述超聲波輔助提取的條件為：溫度40-100℃，超聲功率100-600W，頻率6-10KHz，超聲時間20-60min。

7.根據權利要求1所述的一種桑葉活性物質的提取方法，其特征在于：所述大孔吸附樹脂D301G處理步驟為：將脫蛋白桑葉提取液加入經預處理的D301G樹脂層析柱中，按照D301G樹脂：脫蛋白桑葉提取液＝1.2-2.0:1(w/v)，流速控制在1-3ml/min收集流出液。

8.根據權利要求7所述的一種桑葉活性物質的提取方法，其特征在于：所述的大孔吸附樹脂D301G預處理是指：大孔吸附樹脂D301G先用水浸泡20-24h，用水洗至澄清，傾去水后加1-2M HC1溶液浸泡20-24h，水洗至中性，加1-2M NaOH溶液浸泡20-24h，用水洗至中性。

9.根據權利要求1所述的一種桑葉活性物質的提取方法，其特征在于：所述超濾步驟為：采用超濾膜分子量為6000-12000Da的中空纖維素膜進行超濾，得桑葉多糖樣品。

10.根據權利要求1所述的一種桑葉活性物質的提取方法，其特征在于：所述真空冷凍干燥步驟為：將桑葉多糖樣品于-10～-20℃下冷凍1-2h，然后轉入-60～-80℃下冷凍6-8h，然后轉入真空冷凍干燥機干燥，得精制的桑葉多糖。