[發明專利]一種微量蛋白質樣品濃縮的方法在審
| 申請號： | 201811315445.3 | 申請日： | 2018-11-06 |
| 公開（公告）號： | CN109438551A | 公開（公告）日： | 2019-03-08 |
| 發明（設計）人： | 陸天聰 | 申請（專利權）人： | 北京蛋白世界生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K1/113 | 分類號： | C07K1/113;C07K1/34;C12P21/06 |
| 代理公司： | 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411 | 代理人： | 蘇友娟 |
| 地址： | 100020 北京市朝陽區*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 微量蛋白樣品 微量蛋白質 樣品濃縮 質譜樣品 二硫蘇糖醇 加樣緩沖液 樣品混合物 超濾濃縮 處理操作 蛋白產物 蛋白結構 蛋白樣品 加熱變性 濃度蛋白 濃縮處理 微量蛋白 樣品損失 質譜鑒定 超濾管 二硫鍵 得率 多肽 酶解 質譜 尿素 蛋白質 還原 檢測 分析 | ||
1.一種微量蛋白質樣品濃縮的方法，其特征在于，包括以下步驟：
a)向生物微量蛋白樣品中Laemmli加樣緩沖液和二硫蘇糖醇，在90～100℃下反應5min；
b)將加入步驟a)得到的混合物冷卻至室溫后加入尿素粉末，溶解；
c)將步驟b)得到的溶解物離心濃縮，并用尿素進行沖洗，得到濃縮物；
d)將步驟c)得到的濃縮物進行SDS-PAGE電泳，得到蛋白質凝膠；
e)將步驟d)得到的蛋白質凝膠進行膠內酶解，得到質譜樣品；
f)將步驟e)得到的質譜樣品進行質譜分析，并通過數據庫檢索得到生物樣品的多肽以及蛋白鑒定信息。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物微量蛋白樣品與所述2×Laemmli加樣緩沖液體積比為1：1。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述二硫蘇糖醇的終濃度為50mM/L。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，離心濃縮前所述混合物中尿素的濃度為8mol/L。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，超濾離心采用的是10kDa的超濾離心管。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)中所述尿素的濃度為8mol/L。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟e)中膠內酶解具體步驟為將蛋白質凝膠的色部分切成小塊依次進行膠塊脫色、脫水、還原、二硫鍵封閉，再加入胰蛋白酶過夜，提取肽段，真空干燥，得到質譜樣品。
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