[發(fā)明專利]一種菌種保藏劑及利用該保藏劑厭氧冷凍保藏基因工程菌的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811313009.2
• 申請日: 2018-11-06
• 公開（公告）號: CN109294916A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王洪;張斯歐
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱艾諾衛(wèi)康科技發(fā)展有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市偉晨專利代理事務(wù)所(普通合伙) 23209
• 代理人: 劉坤

1.一種菌種保藏劑，其特征在于，所述保藏劑含有如下質(zhì)量份的組分：50～80份低溫保護(hù)劑、2～5份抗生素選擇劑和5～8份分散劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種菌種保藏劑，其特征在于，所述保藏劑還含有0.1～0.5份的谷氨酸鈉或L-半胱氨酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種菌種保藏劑，其特征在于，所述低溫保護(hù)劑為甘油、DMSO或丙三醇中的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種菌種保藏劑，其特征在于，所述抗生素選擇劑為卡那霉素、氨芐青霉素或氯霉素中的一種或幾種的組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種菌種保藏劑，其特征在于，所述卡那霉素、氨芐青霉素或氯霉素均為濃度為20～25mg/L的液體，且經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌后再加入保藏劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述一種菌種保藏劑，其特征在于，所述分散劑由3～5份脫脂牛奶和2～3份低聚糖組成。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述一種菌種保藏劑，其特征在于，所述低聚糖為海藻糖、蔗糖或麥芽糖中的一種。

8.一種利用權(quán)利要求1-7任一所述菌種保藏劑厭氧冷凍保藏基因工程菌的方法，其特征在于，所述方法步驟如下：

步驟一、將菌種保藏劑放入?yún)捬豕苤?，向厭氧管中通一定時(shí)間氮?dú)夂?，蓋上厭氧管的塞子和蓋子，121℃高溫滅菌20min待用；

步驟二、將基因工程菌用LB培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)過夜至對數(shù)生長期，取新鮮菌液裝入?yún)捬豕?，在通氮?dú)獾那闆r下將步驟一得到的無菌厭氧菌種保藏劑加入裝有新鮮菌液的厭氧管中，向此厭氧管中通一定時(shí)間氮?dú)?，蓋上塞子和蓋子，置于-20℃或-80℃下冷凍保藏。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述一種利用菌種保藏劑厭氧冷凍保藏基因工程均的方法，其特征在于，步驟一和步驟二中向厭氧管中通氮?dú)獾臅r(shí)間均為10～15min。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述一種利用菌種保藏劑厭氧冷凍保藏基因工程均的方法，其特征在于，所述新鮮菌液與菌種保藏劑的體積比為1:1。