[發(fā)明專利]一種提高鹽生杜氏藻產(chǎn)油能力的馴化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811305001.1
• 申請(qǐng)日: 2018-11-02
• 公開（公告）號(hào): CN109355192B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 凌雪萍;段然;盧英華;周芯羽;郭曉昀;陳翠雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/12
• 分類號(hào): C12N1/12;C12N1/36;C12R1/89
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

1.一種提高鹽生杜氏藻產(chǎn)油能力的馴化方法，其特征在于：使用乙酰輔酶A羧化酶抑制劑對(duì)鹽生杜氏菌進(jìn)行馴化，具體包括如下步驟：

（1）將鹽生杜氏藻接種于f/2液體培養(yǎng)基，同時(shí)添加不同濃度的乙酰輔酶A羧化酶抑制劑，同時(shí)以未添加乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的f/2液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)過程作為對(duì)照，確定適合馴化的乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的適宜濃度；所述乙酰輔酶A羧化酶抑制劑為稀禾啶，濃度為150~700μmol/L；適宜濃度為400~430μmol/L；

（2）將鹽生杜氏藻接種至含有上述適宜濃度的乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的f/2液體培養(yǎng)基中，在正常條件下進(jìn)行馴化培養(yǎng)，獲得馴化培養(yǎng)液；

（3）按照一定的周期對(duì)馴化培養(yǎng)液進(jìn)行傳代，使用含有上述適宜濃度的乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的f/2液體培養(yǎng)基作為傳代培養(yǎng)基；其中，傳代的周期為1~5d，并使用處于對(duì)數(shù)生長期，OD₆₉₀為0.1~0.5的藻液作為種子液，按照5~20%的接種量進(jìn)行傳代；

（4）當(dāng)傳代至一定次數(shù)后，將所得藻種接種至不含乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的f/2液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至藻液OD₆₉₀達(dá)到1.0時(shí)，測定其中藻體生物量和油脂含量，并分析油脂組成，獲得馴化藻種；

（5）將所得馴化藻種繼續(xù)接種于不含乙酰輔酶A羧化酶抑制劑的f/2液體培養(yǎng)基中，傳代一定次數(shù)，培養(yǎng)至藻液OD₆₉₀達(dá)到1.0時(shí)，測定培養(yǎng)液中藻體生物量和油脂含量，并分析油脂組成，以驗(yàn)證所得馴化菌株的遺傳穩(wěn)定性；

上述培養(yǎng)均為光照培養(yǎng)，光照培養(yǎng)的溫度為22~28 ℃，光照強(qiáng)度5000~10000 lx，光暗比12 h:12 h，培養(yǎng)過程不充氣，每日隨機(jī)調(diào)換搖瓶位置并搖動(dòng)2~3次。