[發明專利]一種靶向KIF20A陽性胰腺癌雙特異性抗體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201811302589.5
• 申請日: 2018-11-02
• 公開（公告）號: CN109400710A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 賈原;張俊萍;韓亞萍;郭繼強;王琳;李芳;王玉華
• 申請（專利權）人: 山西大醫院（山西醫學科學院）
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C07K16/30;C07K16/28;C07K1/34;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 太原申立德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14115
• 代理人: 郭海燕

本發明公開了一種靶向KIF20A陽性胰腺癌雙特異性抗體及其制備方法和應用。所述抗體通過下述方法制備得到：(1)選購Anit?CD3+，Anti?KIF20A單克隆抗體；(2)取人源CD3單克隆抗體，溶于交聯劑Traut's試劑中，得到人源CD3單鏈抗體；(3)取人源KIF20A單克隆抗體，溶于交聯劑Sulfo?SMCC中，得到人源KIF20A單鏈抗體；(4)將人源CD3單鏈抗體和人源KIF20A單鏈抗體混合，室溫下經Sephrose?G25凝膠層析柱分離純化，取出多余的交聯劑，得到單鏈抗體；(5)將純化得到的單鏈抗體立即裝入含有緩沖液的透析袋中混合，并于4℃下在緩沖液中透析作用18小時，得到雙抗體復合物；(6)采用SDS?PAGE凝膠電泳鑒定得到的雙抗體復合物分子量，Sephrose?G25凝膠柱純化并超濾濃縮，得到雙特異性抗體復合物。

技術領域

本發明屬于生物醫藥、細胞生物學、腫瘤臨床醫學等技術領域，具體涉及一種靶向KIF20A陽性胰腺癌雙特異性抗體及其制備方法和應用。

背景技術

胰腺癌，是一種高致死率的惡性腫瘤，五年生存期僅為5％左右，且預后效果極差。手術是目前可以延長生存期的有效方法，但胰腺癌患者可手術人群比例僅為9-22％。因此，迫切需要探索一種療效更優的治療方法。

腫瘤免疫治療因其副作用小、特異性強等特點，被公認為是治療胰腺癌的有效途徑之一，特別是胰腺癌的特異性T淋巴細胞毒性(CTL)效應研究更是學術界關注的焦點，目前關于CTL治療胰腺癌的眾多基礎及臨床研究正在開展，顯示特異性T淋巴細胞具有深遠而廣闊的應用前景。而針對誘導特異性CTL的腫瘤抗原的篩選及鑒定也成為學術界廣泛關注的熱點。KIF20A(有絲分裂驅動蛋白樣2)作為一種腫瘤相關抗原，在胰腺癌細胞中高表達而在正常細胞中不表達(或低表達)，對胰腺癌的免疫治療(CTL)具有很大開發潛力。

發明內容

本發明針對背景技術中的問題，提供一種靶向KIF20A陽性胰腺癌雙特異性抗體及其制備方法和應用。

本發明為解決上述問題而采取的技術方案為：

一種靶向KIF20A陽性胰腺癌雙特異性抗體，通過下述方法制備得到：

(1)選購Anit-CD3+，Anti-KIF20A單克隆抗體；

(2)取1mg人源CD3單克隆抗體，溶于0.3-0.6mM交聯劑Traut's試劑中，得到人源CD3單鏈抗體；

(3)取1mg人源KIF20A單克隆抗體，溶于0.3-0.6mM交聯劑Sulfo-SMCC中，得到人源KIF20A單鏈抗體；

(4)將步驟(2)的人源CD3單鏈抗體和步驟(3)的人源KIF20A單鏈抗體混合，室溫下經Sephrose-G25凝膠層析柱分離純化，取出多余的交聯劑，得到單鏈抗體；

(5)將步驟(4)純化得到的單鏈抗體立即裝入含有緩沖液的透析袋中混合，并于4℃下在緩沖液中透析作用18小時，得到雙抗體復合物；

(6)采用SDS-PAGE凝膠電泳鑒定步驟(5)得到的雙抗體復合物分子量，Sephrose-G25凝膠柱純化并超濾濃縮，得到雙特異性抗體復合物。

作為本發明的一種優選實施方式，本發明所述的Sephrose-G25凝膠層析柱平衡緩沖體系為20mMTris，100mMNaCl，pH7.3。

作為本發明的一種優選實施方式，本發明所述的透析袋孔徑大小為10kd。

作為本發明的一種優選實施方式，本發明所述的透析袋中緩沖液的組成為：20mMTris，100mMNaCl,pH7.3。

一種靶向KIF20A陽性胰腺癌雙特異性抗體的制備方法，包括以下步驟：

(1)選購Anit-CD3+，Anti-KIF20A單克隆抗體；