[發明專利]干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 201811299528.8
• 申請日: 2018-11-02
• 公開（公告）號: CN109164194A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發明（設計）人: 鄒敏旭;劉輝宇;張瑞雪;王猛
• 申請（專利權）人: 質譜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓;尹妍

本發明公開了干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法及其試劑盒。采用萃取液萃取干血斑獲得干血斑萃取液，在內標品中加入干血斑萃取液，混勻直至完全溶解，真空干燥制成內標品液，將內標品液用干血斑萃取液稀釋成工作液，利用工作液萃取待測濾紙片進行振蕩孵育，采用串聯質譜法檢測樣本中溶血磷脂酰膽堿類。本發明的檢測方法高通量、高敏感、簡單易行，可用于篩查新生兒X連鎖腎上腺腦白質營養不良（XALD）癥，也可以用于輔助診斷，增加新生兒遺傳代謝疾病的篩查種類，給與及時診斷，使患兒得以及時治療，減少出生缺限兒童的患病率。

技術領域

本發明涉及生化檢測設備技術領域，尤其涉及一種流動進樣-串聯質譜法篩查濾紙干血片中多種溶血磷脂酰膽堿(Lyso-PC)濃度的定量檢測技術及試劑盒。

背景技術

新生兒遺傳代謝病的篩查(Neonatal Screening，簡稱新篩)是對一些危害兒童生命、導致兒童體格及智能發育障礙的先天性、遺傳性疾病進行篩查，以便作出早期診斷，在臨床癥狀未表現之前或表現輕微時得以早期治療，防止機體組織器官發生不可逆的損傷，避免患兒發生嚴重智力低下、嚴重疾病甚至死亡。

串聯質譜法(TandemMass Spectrometry，MS/MS)是新篩的一個有用的檢測工具，能在幾分鐘內對一個濾紙干血片樣本進行幾十種代謝產物分析，實現了“一次實驗檢測多種疾病”的要求，使新篩在內容和質量上都提高到一個新水平。

發明內容

本發明的目的在于提供干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法及其試劑盒。

為實現上述技術目的，本發明采用如下技術方案：

一種干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法，所述溶血磷脂酰膽堿類為20:0溶血磷脂酰膽堿；22:0溶血磷脂酰膽堿、24:0溶血磷脂酰膽堿和26:0溶血磷脂酰膽堿；所述方法包括如下步驟：

(1)制備內標品液：采用萃取液萃取干血斑獲得干血斑萃取液，在內標品中加入干血斑萃取液，混勻直至完全溶解，真空干燥制成內標品液；

(2)制備工作液：將步驟(1)制備的內標品液用干血斑萃取液稀釋成工作液；

(3)利用打孔器將待測濾紙片、質控品濾紙片打孔，放入V截底型96孔板中，之后在各孔中加入步驟(2)制備的工作液；將96孔板密封放入孵育振蕩器內孵育；

(4)振蕩結束后，取孵育溶液，采用串聯質譜法檢測樣本中溶血磷脂酰膽堿類。

本發明的方法，所述步驟(1)中，內標品成分為d₄-20:0溶血磷脂酰膽堿、¹³C₆-22:0溶血磷脂酰膽堿、¹³C₆-24:0溶血磷脂酰膽堿和¹³C₆-26:0溶血磷脂酰膽堿。所述萃取液為含有0.05％甲酸的80:20甲醇水溶液。

所述步驟(2)中，將內標品溶液用干血斑萃取液按體積110倍稀釋成工作液；稀釋后內標品濃度為4μmol/L。

所述步驟(3)中，將96孔板密封放入孵育振蕩器內，在溫度為45℃±5℃、振蕩頻率為650-750轉/分的條件下，振蕩孵育45分鐘。

所述質控品包括低水平質控及高水平質控品，低水平質控品為含1μmol/L的20:0溶血磷脂酰膽堿、22:0溶血磷脂酰膽堿、24:0溶血磷脂酰膽堿和26:0溶血磷脂酰膽堿的人全血濾紙干血片；高水平質控品為含5μmol/L的20:0溶血磷脂酰膽堿、22:0溶血磷脂酰膽堿、24:0溶血磷脂酰膽堿和26:0溶血磷脂酰膽堿的人全血濾紙干血片。

所述步驟(4)中，通過多反應監控MRM模式檢測，質譜條件見下表：

表1溶血磷脂酰膽堿類檢測質譜條件