[發明專利]干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 201811299528.8
• 申請日: 2018-11-02
• 公開（公告）號: CN109164194A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發明（設計）人: 鄒敏旭;劉輝宇;張瑞雪;王猛
• 申請（專利權）人: 質譜生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 江蘇致邦律師事務所 32230
• 代理人: 徐蓓;尹妍

1.一種干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法，其特征在于，所述溶血磷脂酰膽堿類為20:0溶血磷脂酰膽堿；22:0溶血磷脂酰膽堿、24:0溶血磷脂酰膽堿和26:0溶血磷脂酰膽堿；所述方法包括如下步驟：

(1)制備內標品液：采用萃取液萃取干血斑獲得干血斑萃取液，在內標品中加入干血斑萃取液，混勻直至完全溶解，真空干燥制成內標品液；

(2)制備工作液：將步驟(1)制備的內標品液用干血斑萃取液稀釋成工作液；

(3)利用打孔器將待測濾紙片、質控品濾紙片打孔，放入V截底型96孔板中，之后在各孔中加入步驟(2)制備的工作液；將96孔板密封放入孵育振蕩器內孵育；

(4)振蕩結束后，取孵育溶液，采用串聯質譜法檢測樣本中溶血磷脂酰膽堿類。

2.根據權利要求1所述的一種干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中，內標品成分為d₄-20:0溶血磷脂酰膽堿、¹³C₆-22:0溶血磷脂酰膽堿、¹³C₆-24:0溶血磷脂酰膽堿和¹³C₆-26:0溶血磷脂酰膽堿。

3.根據權利要求1所述的一種干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中，萃取液為含有0.05％甲酸的80:20甲醇水溶液。

4.根據權利要求1所述的一種干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中，將內標品溶液用干血斑萃取液按體積110倍稀釋成工作液；稀釋后內標品濃度為4μmol/L。

5.根據權利要求1所述的一種干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法，其特征在于，所述步驟(3)中，將96孔板密封放入孵育振蕩器內，在溫度為45℃±5℃、振蕩頻率為650-750轉/分的條件下，振蕩孵育45分鐘。

6.根據權利要求1所述的一種干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法，其特征在于，所述步驟(3)中，質控品包括低水平質控及高水平質控品，低水平質控品為含1μmol/L的20:0溶血磷脂酰膽堿、22:0溶血磷脂酰膽堿、24:0溶血磷脂酰膽堿和26:0溶血磷脂酰膽堿的人全血濾紙干血片；高水平質控品為含5μmol/L的20:0溶血磷脂酰膽堿、22:0溶血磷脂酰膽堿、24:0溶血磷脂酰膽堿和26:0溶血磷脂酰膽堿的人全血濾紙干血片。

7.根據權利要求1所述的一種干血片中溶血磷脂酰膽堿類的檢測方法，其特征在于，所述步驟(4)中，通過多反應監控MRM模式檢測，質譜條件見下表1：

表1溶血磷脂酰膽堿類檢測質譜條件

8.一種檢測干血片中溶血磷脂酰膽堿類的試劑盒，其特征在于，所述溶血磷脂酰膽堿類為20:0溶血磷脂酰膽堿；22:0溶血磷脂酰膽堿、24:0溶血磷脂酰膽堿和26:0溶血磷脂酰膽堿；

所述試劑盒包括：

(1)萃取液：含有0.05％甲酸的80:20甲醇水溶液；

(2)內標品：d₄-20:0溶血磷脂酰膽堿、¹³C₆-22:0溶血磷脂酰膽堿、¹³C₆-24:0溶血磷脂酰膽堿和¹³C₆-26:0溶血磷脂酰膽堿；

(3)質控品，所述質控品為含有已知濃度的20:0溶血磷脂酰膽堿；22:0溶血磷脂酰膽堿、24:0溶血磷脂酰膽堿和26:0溶血磷脂酰膽堿的濾紙干血片，包括高水平質控品和低水平質控品。

9.根據權利要求8所述的一種檢測干血片中溶血磷脂酰膽堿類的試劑盒，其特征在于，所述高水平質控品濃度為5μmol/L，低水平質控品濃度為1μmol/L。

10.根據權利要求8所述的一種檢測干血片中溶血磷脂酰膽堿類的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括V截底型96孔板、V型96孔板、微孔板粘貼膜、鋁箔制微孔板封套、質量分析報告和產品說明書。