[發(fā)明專(zhuān)利]一種二妙散對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抑炎因子表達(dá)試驗(yàn)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811299140.8
• 申請(qǐng)日: 2018-10-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109288911A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郝慧琴;李振;關(guān)建紅;王澤;高玉亭
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 山西中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K36/756
• 分類(lèi)號(hào): A61K36/756;A61P19/02;A61P29/00;A61P37/04;G01N33/50
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本發(fā)明公開(kāi)了一種二妙散對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抑炎因子表達(dá)試驗(yàn)方法，試驗(yàn)材料包括80只SD大鼠、生理鹽水、三種劑量的二妙散水煎劑、甲氨蝶呤，80只SD大鼠灌胃生理鹽水，灌胃三種劑量的二妙散水煎劑，灌胃甲氨蝶呤2.7mg/(kg·周)，為陽(yáng)性對(duì)照組，每次灌胃1mL/100g，連續(xù)灌胃15天，取血，殺檢，建立CIA大鼠模型，觀察脾臟系數(shù)改變、關(guān)節(jié)滑膜切片病理改變；檢測(cè)血清IL?6、TNF?α水平的變化、吞噬細(xì)胞及IL?6、TNF?α水平的變化、及膽堿抗炎通路關(guān)鍵受體α7nAChR的表達(dá)等指標(biāo)探討RA治療機(jī)理。本發(fā)明結(jié)果顯示二妙散組關(guān)節(jié)腔滑膜組織成絨毛狀，伸向關(guān)節(jié)腔內(nèi)，炎性細(xì)胞較少，二妙散對(duì)CHRNA7具有調(diào)控作用，為探究二妙散治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥理機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種二妙散對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抑炎因子表達(dá)試驗(yàn)方法。

背景技術(shù)

二妙散源自《丹溪心法》，由蒼術(shù)和黃柏等比配伍而成，黃柏苦寒清熱，蒼術(shù)苦溫燥濕，為祛濕劑，是中醫(yī)治療RA的經(jīng)典基本方。目前文獻(xiàn)報(bào)道二妙散的研究主要集中在單味藥的含量測(cè)定及藥效，以及二妙散方劑對(duì)關(guān)節(jié)組織和血清炎癥因子的作用。Chen等證實(shí)二妙散有免疫抑制作用，其中黃柏為主要抑制藥，而小檗堿為其主要免疫抑制成分，對(duì)免疫系統(tǒng)的多個(gè)環(huán)節(jié)均有較強(qiáng)的免疫抑制作用。用弗氏完全佐劑誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎模型，發(fā)現(xiàn)二妙散和靈芝制劑在關(guān)節(jié)炎大鼠膝蓋中具有止痛和抗炎作用，但沒(méi)有進(jìn)一步研究二妙散的抗炎作用機(jī)制。研究人員將二妙散作用于遲發(fā)型肝損傷小鼠超敏反應(yīng)誘導(dǎo)期，結(jié)果顯示抗血清轉(zhuǎn)氨酶水平顯著升高、組織病理學(xué)特性改變，表明二妙散具有免疫調(diào)節(jié)功能。

高度細(xì)胞類(lèi)型依賴性α7煙堿乙酰膽堿受體(α7nAChRs)表達(dá)在異源表達(dá)系統(tǒng)中。α7nAChR失衡可能參與不同的疾病，如精神分裂癥、阿爾茨海默病，以及炎癥和免疫功能的調(diào)節(jié)高度相關(guān)。有報(bào)道顯示，巨噬細(xì)胞等諸多免疫細(xì)胞上均表達(dá)α7nAChR，并通過(guò)基因敲除小鼠實(shí)驗(yàn)證實(shí)了α7nAChR在膽堿能抗炎通路中處于核心地位。α7nAChR是調(diào)節(jié)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的重要因子，其在許多不同的非神經(jīng)元細(xì)胞如血管和腦內(nèi)皮細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞均有不同程度的表達(dá)。小膠質(zhì)細(xì)胞上的α7nAChR激活也可抑制促炎因子如腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNF-α)的產(chǎn)生。

CHRNA7是編碼α7nAChR蛋白(uniprot ID P36544)的關(guān)鍵基因，是配體門(mén)控離子通道超家族的成員，其促進(jìn)突觸處的快速信號(hào)傳遞，其異五聚體由同源亞基組成。CHRNA7編碼的蛋白質(zhì)形成同源寡聚體通道，對(duì)鈣離子具有顯著滲透性。研究表明，CHRNA7基因主要表達(dá)在小鼠杏仁核后部杏仁核和CA3區(qū)域，以及人類(lèi)乳頭體中。CHRNA7與CHRNA基因家族與參與神經(jīng)疾病的JAK2、AKT1和PICK1存在基因互作，表明CHRNA7在神經(jīng)元發(fā)育階段的細(xì)胞中受神經(jīng)疾病調(diào)節(jié)。

現(xiàn)有的對(duì)于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療，還在研究實(shí)驗(yàn)階段，目前沒(méi)有較好實(shí)驗(yàn)方法證明二妙散對(duì)于減少炎癥因子和增加抑炎因子的表達(dá)有作用。缺乏二妙散治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥理機(jī)制的科學(xué)依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明的目的在于提供一種二妙散對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抑炎因子表達(dá)試驗(yàn)方法，本發(fā)明為探究二妙散治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥理機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種二妙散對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎抑炎因子表達(dá)試驗(yàn)方法，試驗(yàn)材料包括80只SD大鼠、生理鹽水、三種劑量的二妙散水煎劑、甲氨蝶呤，試驗(yàn)方法包括如下步驟：

S1：試驗(yàn)動(dòng)物的處理