[發明專利]一種防治線蟲病的生防菌株SFC-3及其應用

在審

• 申請號: 201811298495.5
• 申請日: 2018-11-02
• 公開（公告）號: CN109207381A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 陳國參;趙俊杰;王繼雯;李冠杰;甄靜;岳丹丹;鞏濤;楊文玲;杜志敏;孫晨陽;楊金星
• 申請（專利權）人: 河南省科學院生物研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;A01N63/04;A01P5/00;C12R1/885
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 蔡文雅

1.一種生防菌株SFC-3，其特征在于，其分類命名為棘孢木霉（Trichoderma asperellum），已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC NO .16097。

2.權利要求 1 所述的生防菌株SFC-3的分離方法，其特征在于，稱取10g根結線蟲病害嚴重的土壤樣品加入裝有90mL無菌水的三角瓶中，置搖床振蕩25-35分鐘，得到稀釋倍數為10^-1的土壤稀釋液，取1mL 10^-1土壤稀釋液加入到裝有9mL無菌水的試管中，得到稀釋倍數為10^-2的土壤稀釋液，取300μL該稀釋液涂布到馬丁氏培養基上，28℃培養3天，待長出真菌菌落后挑邊緣菌絲轉入PDA固體培養基進行純化，獲得純化菌株；

所述的馬丁氏培養基配制方法為：20g葡萄糖、5g蛋白胨、1g磷酸二氫鉀、0 .5g七水硫酸鎂、1%孟加拉紅溶液3mL、20g瓊脂，加入蒸餾水至1000mL，在121℃滅菌30min，使用時每100mL培養基中加入1%鏈霉素液0.3mL；

所述的PDA固體培養基配制方法為：稱取200g土豆削皮后切成小塊放在水里煮沸30min，用四層紗布過濾，向濾液中加入20g蔗糖和20g瓊脂，定容至1000mL，pH值調為7.0，在121℃滅菌30min。

3.權利要求1或2所述的生防菌株SFC-3在制備防治根結線蟲病產品中的應用。

4.利用權利要求1或2所述的生防菌株SFC-3制備生防菌劑的方法，其特征在于，1）將生防菌株SFC-3接種到PDA液體培養基中于搖床上25℃，180r/min培養12～48h后，在超凈工作臺取樣，采用血球計數板法測定活菌數；

2）當培養至活菌數在1×10⁵CFU/mL以上時，將種子液按照1：100體積比加入PDA液體培養基中，于搖床上25℃，180r/min培養12～48h后，然后5000rpm離心10min，每1000mL培養基中獲得10~15g濕菌，每克濕菌含5×10⁹~10¹¹個菌體，濕菌與無菌水按1g：50mL配成菌劑，成品中活菌總濃度為1×10⁸~10¹⁰ CFU/mL；

所述的PDA液體培養基配制方法為：稱取200g土豆削皮后切成小塊放在水里煮沸30min，用四層紗布過濾，向濾液中加入20g蔗糖，定容至1000mL，pH值調為7.0，在121℃滅菌30min。

5.權利要求4所述的生防菌劑在防治根結線蟲病中的應用。

6.權利要求1或2所述的生防菌株SFC-3在濃度為1×10⁹CFU/mL時，對根結線蟲蟲卵孵化和二齡幼蟲抑制作用最好。