[發明專利]一種肌酸激酶同工酶檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201811298267.8
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109613242A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 田永帥;唐燦
• 申請（專利權）人: 深圳天辰醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/535
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 李艷麗

本發明屬于體外檢測技術領域，具體涉及一種肌酸激酶同工酶檢測試劑盒及其制備方法。本發明所提供的肌酸激酶同工酶檢測試劑盒，包括：磁分離試劑和酶標記抗體；磁分離試劑包括：表面上結合有第一抗CK?MB單克隆抗體和第二抗CK?MB單克隆抗體的磁微粒；酶標記抗體包括：酶標記的第三抗CK?MB單克隆抗體；和/或，酶標記的第四抗CK?MB單克隆抗體；其中，第一、第二、第三和第四抗CK?MB單克隆抗體分別特異于肌酸激酶同工酶的不同表位。本發明磁分離試劑中的磁微粒的表面上結合有特異于肌酸激酶同工酶的不同表位的第一抗CK?MB單克隆抗體和第二抗CK?MB單克隆抗體，可實現多位點識別待測樣品中的CK?MB抗原，增強磁珠抗體與抗原的結合，可避免漏檢的情況，靈敏度高，適用人群廣泛。

技術領域

本發明屬于體外檢測技術領域，具體涉及一種肌酸激酶同工酶檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

心血管疾病是危害我國人民健康和生命的重大致死性疾病，根據衛生部統計，在我國城市中，每十萬人中就有二百三十五人死于心腦血管疾病，占各類疾病引起的死亡的首位，且每年以2％的速度遞增。急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)是指因持久而嚴重的心肌缺血所致的部分心肌急性壞死，是造成心血管病人死亡的主要原因。在臨床上常表現為胸痛、急性循環功能障礙以及反映心肌損傷、缺血和壞死等一系列特征性的心電圖改變。臨床表現常有持久的胸骨后劇烈疼痛、急性循環功能障礙、心律失常、心功能衰竭、發熱、白細胞計數和血清心肌損傷標記酶的升高以及心肌急性損傷與壞死的心電圖進行性演變。中國的急性心肌梗死發病率近年來呈明顯上升趨勢，每年新發至少50萬，現患至少200萬。

肌酸激酶(CK)主要存在于脊椎動物中，也存在于動物的心臟、骨骼肌以及腦等組織的細胞質和線粒體中。CK在人體中存在較廣泛，在血中半衰期約為6-8小時。CK用于催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和ADP之間磷酸轉移的可逆反應，以維持細胞內ATP的生理濃度。CK催化作用是可逆的，即在pH9.0時可催化肌酸和ATP生成磷酸肌酸和ADP，為正反應；也可在pH6.7時催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，為逆反應。其中，在中性條件下，逆反應是正反應的2-6倍，即以生成ATP為主，以保證組織細胞所需的能量來自ATP。正反應有利于線粒體內氧化磷酸化生成的ATP，以磷酸肌酸的形式進入細胞液，供應細胞生理活動的需要。因此，肌酸激酶是一個與細胞內能量轉運、肌肉收縮和ATP的再生有直接關系的重要激酶。

CK是一個二聚體，以3種同工酶的形式存在：2個B單體(CK-BB)，2個M單體(CK-MM)，MB的單體混合體(CK-MB)。這3種同工酶分子量相同，催化相同的化學反應，但其分子結構和來源不同：CK-BB來源于橫紋肌，CK-MM來源于大腦和消化道，而CK-MB來源于心肌。心肌中CK-MB占CK總量的15％～25％，所以在心肌損傷，特別是急性心肌梗死(AMI)時，測定CK-MB對AMI的診斷有極大的臨床意義。有關實驗表明，在癥狀發生后12～48d時采樣分析，CK-MB質量的臨床靈敏度和臨床特異性分別為96.8％和89.6％，這就使它在眾多心肌標志物中脫穎而出，成為對AMI臨床診斷起重要作用的一個指標。在實際臨床診斷中，可通過結合cTnI、Myo等心肌特異標志物的檢測結果來進一步提高臨床診斷的準確性。

CK-MB的常規測定方法主要為免疫抑制法，測定CK-MB的活力。正常血清中CK同工酶主要為CK-MM、CK-MB和極少量的CK-BB，由于CK-BB的含量極微，可忽略不計，因此此方法假設血清中只有CK-MM和CK-MB，在試劑中加入抗CK-M亞單位的多克隆抗體,從而抑制CK-MM和CK-MB中M亞單位活性,測得結果相當于CK-MB中B亞單位活性,將結果乘以2即相當于CK-MB活力。此方法迅速，簡介，省時，有較高的敏感性。然而，該法的影響因素和缺陷眾多：

1)酶易于老化

CK-MB活性的酶易于老化，主要表現為酶構象改變。其引起CK-MB活性檢測降低或正常的原因可能是由于過了檢測時間，以致血清中酶老化使酶的催化活性降低或喪失，從而導致酶的活化能升高所致。