[發明專利]一種多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法

在審

• 申請號: 201811298255.5
• 申請日: 2018-11-02
• 公開（公告）號: CN109527521A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 周春霞;洪鵬志;朱潘紅;劉喚明;楊萍;李承勇;朱東宏;千忠吉
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: A23L29/281
• 分類號: A23L29/281;A23L29/30;A23L29/00;C08J3/02;C08L89/00;C08L5/00;C08L5/04;C08K5/31;C08K5/42;C07K14/46
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.前處理，將新鮮羅非魚宰殺，取其背部白肉，絞碎后低溫保藏，所有操作均在4℃條件下進行；

S2. 肌球蛋白的提取：取新鮮攪碎的魚肉，加5倍（g/mL, w/v）的溶液A，在20 000 r/min條件下高速勻漿30s，靜置15 min后離心取沉淀，重復上述過程3次；向所得沉淀中加入3倍（g/mL, w/v）溶液B，攪拌15min后離心；紗布過濾，取濾液用9倍（mL/mL，v/v）冰蒸餾水稀釋，靜置10 min后離心得沉淀；向沉淀中加入1/5倍（g/mL, w/v）溶液C，混勻后放置2 h，混合體系中添加1/10倍（g/mL, w/v）溶液D，攪拌1 h；加入飽和硫酸銨至飽和度40%時離心取上清液，繼續加飽和硫酸銨至飽和度45%時離心取沉淀；沉淀于透析液E中透析至無SO₄^2-檢出，然后離心分離，所得上清液即為肌球蛋白溶液；

S3. 熱誘導凝膠的制備：將提取的肌球蛋白用混合溶液透析8-24 h，將透析后的肌球蛋白溶液調整至20-100mg/mL,加入0.2-0.8%多糖溶液，4℃攪拌10-25min，在20℃下，每分鐘升高0.5-2℃/min，直至升高到80℃，保溫15-40 min，而后迅速放入冰水浴中冷卻，即獲得羅非魚肌球蛋白熱誘導凝膠。

2.根據權利要求1所述的多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，所述多糖溶液為海藻多糖溶液，所述海藻多糖為褐藻多糖、紅藻多糖、綠藻多糖和藍藻多糖中的任一種。

3.根據權利要求1所述的多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，所述混合溶液包括10-25 mmol/L PBS，55-150mmol/L的NaCl、5-200mmol/L氨基酸溶液。

4.根據權利要求3所述的多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，所述氨基酸溶液包括牛磺酸、精氨酸中的任一種或兩種的混合物。

5.根據權利要求3所述的多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，所述氨基酸溶液為牛磺酸與精氨酸物質的量比為7-2:3的混合物。

6.根據權利要求1所述的多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，所述溶液A包括10-30 mmol/L PBS、1-3 mmol/L PMSF、0.01-0.05%疊氮鈉，溶液pH為6.7-7.5。

7.根據權利要求1所述的多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，所述溶液B包括 0.15-0.75 mol/L KCl、3-8 mmol/L ATP、4-11 mmol/L MgCl₂、0.1-0.5 mmol/LDTT，溶液pH5.8-7.0。

8.根據權利要求1所述的多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，所述溶液C包括0.05-0.25 mol/L Tris-maleic acid、1.3-2.8 mol/L KCl、0.2-0.9 mmol/L DTT，溶液pH為6.8-8.2。

9.根據權利要求1所述的多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，所述溶液D包括0.07-0.22 mol/L ATP、35-65 mmol/L MgCl₂、3.2-8.6 mmol/L EGTA、pH 7.0-8.2。

10.根據權利要求1所述的多糖-肌球蛋白復合熱凝膠的制備方法，其特征在于，所述透析液E包括10-25 mmol/L PBS、0.5-2mol/L NaCl，溶液pH 6.5-8.2。