[發明專利]一種春蘭的組織培養方法

在審

• 申請號: 201811296576.1
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109042342A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 杜正麗
• 申請（專利權）人: 翁源縣天下澤雨農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 中山市高端專利代理事務所(特殊普通合伙) 44346
• 代理人: 鐘作亮

本發明涉及一種春蘭的組織培養方法，包括外植體的消毒和莖尖的剝離、莖尖誘導根狀莖、根狀莖的增殖、根狀莖分化出芽、壯苗培養和苗生根培養等步驟，在莖尖誘導根狀莖、根狀莖的增殖、根狀莖分化出芽、壯苗培養和苗生根培養時采用不同的培養基去進行培養，滿足各個時期的營養和激素需求。該發明，采用無性繁殖的方式，可以較快的得到更多的春蘭植株，滿足春蘭大規模商業的生產需求。

技術領域

本發明涉及植物生物領域，通過組織培養的無性繁殖獲得植株，特別涉及一種春蘭的組織培養方法。

背景技術

春蘭,別名朵朵香、雙飛燕、草蘭、草素、山花，原產我國，主要分布在浙江、安徽、河南、甘肅、四川、云南等地，是中國蘭花大家族中品種最豐富多彩的一種。春蘭是我國蘭科植物中分布最廣、品種最豐富的一類蘭花。如今國內已形成一股“國蘭熱”，推動了蘭花產業的迅速發展，也導致了蘭花資源的過度開發和嚴重破壞，致使春蘭已成為瀕危物種，“天價蘭花”不時見諸報端。由于過度的采挖和環境的惡化，春蘭資源受到嚴重的破壞，常規分株繁殖又不利于春蘭品種的優種選育和推廣，現有的春蘭組織培養方法不僅周期長，且根狀莖分化芽少，芽長成的大苗生根難，生產成本高、回報率低。針對這些問題，本發明提供一種春蘭快速繁殖方法。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種春蘭的組織培養方法，提高根狀莖分化出芽、小苗生根的概率。

本發明所采用的技術方案為：

一種春蘭的組織培養方法，包括外植體的消毒和莖尖的剝離、莖尖誘導根狀莖、根狀莖的增殖、根狀莖分化出芽、壯苗培養和苗生根培養等步驟：

在外植體的選擇消毒和莖尖的剝離時，取春蘭葉片未張開的芽為外植體，用流水沖洗春蘭的芽，用酒精、漂白水進行消毒處理，多次用無菌水沖洗，采用多次使用不同的消毒劑的方式對外植體進行消毒處理，確保獲得的外植體為無菌體；然后將外層葉片切除，再用升汞、無菌水處理，最后用無菌解剖刀，剝出莖尖，保證得到的莖尖的不會被污染，提高后期培養的存活率。

將剝取的莖尖進行誘導根狀莖培養，將莖尖接種到由美國花寶1號+馬鈴薯汁500-1500mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+蛋白胨500-1500mg/L+活性炭1g/L組成的第一培養基培養，此培養基中的各組分及配比恰好滿足春蘭莖尖的營養需求，培養數月后可獲得根狀莖。

然后將根狀莖接種至由MS+6-芐氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-5mg/L+活性炭1g/L組成的根狀莖的增殖培養基內進行增殖培養，依據實驗結果，在這種成分及比例的培養基中培養，一條根狀莖可增殖4-5倍，可獲得大量的根狀莖，方便后期以指數的增長形式獲得春蘭植株。

接下來將根狀莖進行分化出芽培養，將根狀莖接種至由MS+6-芐氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-5mg/L+激動素1-10mg/L組成的根狀莖分化出芽培養基中進行分化出芽培養，根狀莖分化出芽培養基中的組分及含量能夠滿足根狀莖分化出芽所需的營養和激素需求，能更好的促進根狀莖的分化，得到小芽；依據實驗結果，每條根狀莖均可分化出3-5個小芽。

根狀莖分化出多個小芽后，則進行壯苗培養，將小芽接種至由MS+6-芐氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-2mg/L+激動素1-10mg/L+香蕉汁500-1500mg/L組成的壯苗培養基中培養，在培養基中添加合適比例的6-芐氨基腺嘌呤、萘乙酸、激動素可以更好的促進細胞分裂，再加入一定量的營養物質，可以更好的促進小芽分化生長，培養一段時間后，可以獲得小苗。

將獲得的小苗進行苗生根培養，將小苗接種至由美國花寶1號+萘乙酸0.1-5mg/L+吲哚丁酸1-5mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+馬鈴薯汁500-1500mg/L+蛋白胨500-1500mg/L+活性炭1g/L組成的苗生根培養基中進行苗生根培養，在培養基中添加萘乙酸和吲哚丁酸可以更好的促進誘導春蘭小苗長根，一段時間后可獲得生根的春蘭苗。