[發明專利]一種春蘭的組織培養方法

在審

• 申請號: 201811296576.1
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109042342A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 杜正麗
• 申請（專利權）人: 翁源縣天下澤雨農業科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 中山市高端專利代理事務所(特殊普通合伙) 44346
• 代理人: 鐘作亮

1.一種春蘭的組織培養方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)外植體的選擇消毒和莖尖的剝離：取春蘭葉片未張開的芽為外植體，用流水沖洗春蘭的芽，用酒精、漂白水進行消毒處理，多次用無菌水沖洗，然后將外層葉片切除，再用升汞、無菌水處理，最后用無菌解剖刀，剝出莖尖；

(2)莖尖誘導根狀莖培養：將莖尖接種到由美國花寶1號+馬鈴薯汁500-1500mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+蛋白胨500-1500mg/L+活性炭1g/L組成的第一培養基中培養數月，獲得根狀莖；

(3)根狀莖的增殖培養：將根狀莖接種至由MS+6-芐氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-5mg/L+活性炭1g/L組成的根狀莖的增殖培養基內進行增殖培養，一條根狀莖增殖4-5倍；

(4)根狀莖分化出芽培養：將根狀莖接種至由MS+6-芐氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-5mg/L+激動素1-10mg/L組成的根狀莖分化出芽培養基中進行分化出芽培養，一條根狀莖分化3-5個芽；

(5)壯苗培養培養：將小芽接種至由MS+6-芐氨基腺嘌呤1-5mg/L+萘乙酸0.1-2mg/L+激動素1-10mg/L+香蕉汁500-1500mg/L組成的壯苗培養基中培養，獲得小苗；

(6)苗生根培養：將小苗接種至由美國花寶1號+萘乙酸0.1-5mg/L+吲哚丁酸1-5mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+馬鈴薯汁500-1500mg/L+蛋白胨500-1500mg/L+活性炭1g/L組成的苗生根培養基中進行苗生根培養，獲得生根的春蘭苗。

2.根據權利要求1所述的一種春蘭的組織培養方法，其特征在于：在外植體的選擇消毒時，先用濃度為70％-75％的酒精浸泡30-35秒，用無菌水沖洗3-4次，然后采用稀釋10倍的漂白水消毒10-15分鐘，用無菌水沖洗3-4次，將外層葉片切除后，再采用濃度為0.1％-0.2％的升汞消毒10-15分鐘，用無菌水沖洗時沖洗3-4次，無菌紙吸干水分，最后剝出高度為0.4-0.8cm的莖尖。

3.根據權利要求1所述的一種春蘭的組織培養方法，其特征在于：在根狀莖的誘導培養時，在第一培養基中培養6個月，前30天莖尖在完全黑暗的環境中培養，之后每天光照12小時，光照強度1000lux，溫度25±1℃。

4.根據權利要求1所述的一種春蘭的組織培養方法，其特征在于：將莖尖誘導獲得的根狀莖轉接至由美國花寶1號+馬鈴薯汁500-1500mg/L+香蕉汁500-1500mg/L+活性炭1g/L組成的第二培養基中繼續培養，獲得優質的根狀莖。

5.根據權利要求1所述的一種春蘭的組織培養方法，其特征在于：在根狀莖的增殖培養時，將根狀莖轉移至根狀莖的增殖培養基中，每天光照12-14小時，光照強度1000lux，溫度25±1℃，培養6個月。

6.根據權利要求1所述的一種春蘭的組織培養方法，其特征在于：在根狀莖分化出芽培養時，將根狀莖接種至根狀莖分化出芽培養基，每天光照12小時，光照強度1000lux，溫度25±1℃，培養6個月，分化出小芽。

7.根據權利要求1所述的一種春蘭的組織培養方法，其特征在于：壯苗培養時，將小芽接種至壯苗培養基中，每天光照12小時，光照強度1000lux，溫度25±1℃，培養4個月，得到小苗。

8.根據權利要求1所述的一種春蘭的組織培養方法，其特征在于：采用高度為3cm以上的小苗進行苗生根培養。