[發明專利]一種多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物及設計、系統進化分析全序列擴增方法

有效

• 申請號: 201811296202.X
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109321664B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 龔理;姜輝;劉炳艦;呂振明;劉立芹
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;C12N15/10;G16B30/10
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

本發明涉及分子生物技術領域，尤其涉及一種多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物及設計、系統進化分析全序列擴增方法，包括如SEQ ID NO.1~24所示的十二對引物。本發明解決了目前沒有能夠對多鱗鯔鰕虎魚進行線粒體基因組全序列擴增的問題，具有（1）一次性擴增出其線粒體基因組，通過測序拼接能夠快速獲得其基因組全序列，便捷高效的優點；（2）提供一種多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物，省時省力，且節約試劑成本；（3）提供的多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物的系統分析方法為多鱗鯔鰕虎魚群體遺傳、種質資源保護和可持續開發利用以及鰕虎魚類的系統發育研究提供了重要的分子手段及數據積累等優點。

技術領域

本發明涉及分子生物技術領域，尤其涉及一種多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物及設計、系統進化分析全序列擴增方法。

背景技術

鰕虎魚科，Gobiidae （G. Cuvier, 1816），硬骨魚綱鱸形目的1科，也是海魚類中最大的1科，通稱鰕虎魚。有196屬1480余種，中國約產40屬120余種。體長一般為100～150毫米，最大者不超過500毫米，最小者僅7～9毫米。

體卵圓形、長形或鰻形，側扁。頭側扁或平扁。眼不突出于頭的背面，無游離下眼瞼。口大，兩頜等長或下頜及頦部突出。上下頜牙多行，有時平直或彎曲，腭骨常無牙。前鰓蓋骨邊緣光滑或具細鋸齒，鰓蓋上方有時具凹陷。體被櫛鱗或圓鱗，有時鱗退化或完全無鱗。無側線。背鰭2個或1個，臀鰭常與第二背鰭同形，相對；背、臀鰭有時與尾鰭相連；胸鰭或大或小，圓形，基部肌肉不發達，不呈臂狀；左右腹鰭愈合成一吸盤，后緣完整或凹入、尾鰭圓形、尖長或內凹。為暖水性和溫水性海水小型魚類，少數為淡水魚類。廣布于除極地以外的海水和淡水水域，但主要密集于印度-西太平洋暖水區域、大西洋中美洲沿岸及地中海歐洲沿岸亦有。

目前關于多鱗鯔鰕虎魚分類及系統發育等方面的研究，大多基于線粒體單個基因或者少數幾個基因序列，關于其線粒體基因組全序列未見報道。考慮到目前多鱗鯔鰕虎魚分類上有爭議，且在遺傳學，尤其是線粒體基因組方面的信息量非常有限，開展線粒體基因組全序列的研究顯得十分必要。

中國專利局于2017年9月29日公開了一種蜘蛛線粒體基因組全序列擴增引物及擴增方法的發明授權，授權公開號：CN104531688B，該發明采用提取蜘蛛基因組的總DNA，通過線粒體基因組DNA的長PCR(L-PCR)擴增和測序對蜘蛛進行鑒定，同樣是采用DNA技術對生物進行鑒定，但其僅對蜘蛛線粒體基因組進行全序列擴增，無法解決目前沒有能夠對多鱗鯔鰕虎魚進行線粒體基因組全序列擴增的問題。

發明內容

為解決上述目前沒有能夠對多鱗鯔鰕虎魚進行線粒體基因組全序列擴增的問題，提供了一種能夠一次性擴增出其線粒體基因組、通過測序拼接能夠快速獲得其基因組全序列、具有簡便、快捷、高效特點的多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物及設計、系統進化分析全序列擴增方法。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

1. 一種多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物，所述的多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物包括十二對引物：其中

第一對引物：

正向引物1如SEQ ID NO.1所示：5’- TAAAGCATAACHCTGAAGATGTTAA - 3’

反向引物1如SEQ ID NO.2所示：5’- GATAGAAACTGACCTGGATTACT - 3’

第二對引物：

正向引物1如SEQ ID NO.3所示：5’- AACHCTGAAGATGTTAAGAT - 3’

反向引物1如SEQ ID NO.4所示：5’- TAAGAATGCAACAGCTAGCAGA - 3’

第三對引物：