[發明專利]一種多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物及設計、系統進化分析全序列擴增方法

有效

• 申請號: 201811296202.X
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109321664B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 龔理;姜輝;劉炳艦;呂振明;劉立芹
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;C12N15/10;G16B30/10
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物，其特征在于，所述的多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物包括十二對引物：其中

第一對引物：

正向引物如SEQ ID NO.1所示：5’- TAAAGCATAACHCTGAAGATGTTAA - 3’

反向引物如SEQ ID NO.2所示：5’- GATAGAAACTGACCTGGATTACT - 3’

第二對引物：

正向引物如SEQ ID NO.3所示：5’- AACHCTGAAGATGTTAAGAT - 3’

反向引物如SEQ ID NO.4所示：5’- TAAGAATGCAACAGCTAGCAGA - 3’

第三對引物：

正向引物如SEQ ID NO.5所示：5’- TACGACCTCGATGTTGGATCAGG - 3’

反向引物如SEQ ID NO.6所示：5’-GCGGTGGATTGTAGACCCATARACAGAGGT- 3’

第四對引物：

正向引物如SEQ ID NO.7所示：5’- TTAAGGTGGCAGAGCCCGGTA - 3’

反向引物如SEQ ID NO.8所示：5’- CAGCTAGCCCTAGGAAGTGTTG - 3’

第五對引物：

正向引物如SEQ ID NO.9所示：5’- RCGCCCAAAGCTAGDATTC - 3’

反向引物如SEQ ID NO.10所示：5’- GGCCCATCTTAACATCTTC - 3’

第六對引物：

正向引物如SEQ ID NO.11所示：5’- CTAAGCCATCCTACCTGTG - 3’

反向引物如SEQ ID NO.12所示：5’- TCAACTCCTCCCTTTCTCG - 3’

第七對引物：

正向引物如SEQ ID NO.13所示：5’- GGCCCATCTTAACATCTTC - 3’

反向引物如SEQ ID NO.14所示：5’- TTTAACCAAGACCRGGTGATTGGAAGTC - 3’

第八對引物：

正向引物如SEQ ID NO.15所示：5’- YGAAGCAGCCGCMTGATACTGACA - 3’

反向引物如SEQ ID NO.16所示：5’- TAGCTGCTACTCGGATTTGCACCAAGAGT - 3’

第九對引物：

正向引物如SEQ ID NO.17所示：5’- TGAATCGACTGGCAATGTCC - 3’

反向引物如SEQ ID NO.18所示：5’- GGAGGWATACCTGTAGAAGA - 3’

第十對引物：

正向引物如SEQ ID NO.19所示：5’-AAGGATAACAGCTCATCCGTTGGTCTTAGG - 3’

反向引物如SEQ ID NO.20所示：5’- AAACTGCAGCCCCTCAGAATGATATTTGTCCTCA - 3’

第十一對引物：

正向引物如SEQ ID NO.21所示：5’- GATAACAGCTCATCCGTTGGTC - 3’

反向引物如SEQ ID NO.22所示：5’- ACAGAACTGCTTGGAGGG - 3’

第十二對引物：

正向引物如SEQ ID NO.23所示：5’- CGAAGCTTGATATGAAAAACCATCGTTG - 3’

反向引物如SEQ ID NO.24所示：5’- GTAAAGTCAGGACCAAGCCTT - 3’；

其中H=A/C/T、R=A/G、D=A/G/T、Y=C/T、M=A/C、W=A/T；

采用上述多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組全序列引物，以多鱗鯔鰕虎魚線粒體基因組DNA為模板 ，進行PCR擴增，擴增條件為：90℃預變性5min，隨后95℃變性40s，56℃退火30s，73℃延伸1～4min，共進行35個循環，最后進行73℃延伸10min，4℃條件下保存。