[發(fā)明專利]一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條、其制備方法及應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811294003.5
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109212239A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發(fā)明（設計）人: 蔡開來;侯蓉;張志和;張夢詩;劉玉良;王涓
• 申請（專利權）人: 成都大熊貓繁育研究基地
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 成都弘毅天承知識產(chǎn)權代理有限公司 51230
• 代理人: 李春霖

本發(fā)明公開了一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條、其制備方法及應用，屬于生物檢測技術領域，包括膠條，所述膠條包括順序搭接的樣品墊，膠體金墊，硝酸纖維素膜和吸水墊，所述膠體金墊上涂有覆蓋有膠體金顆粒標記的鼠抗大熊貓促黃體素β亞基單克隆抗體和兔抗大熊貓促黃體素β亞基多克隆抗體混合液層，所述硝酸纖維素膜上包被有Protein A的質控線，以及包被有兔抗大熊貓促黃體素β亞基多克隆抗體的檢測線，所述樣品墊上還設置有點樣孔。本發(fā)明制備的膠體金免疫層析試紙條儲存方便，操作簡單，檢測速度快，適用于大熊貓尿液中LH的檢測，可用于大熊貓發(fā)情配種季節(jié)現(xiàn)場使用，輔助判斷大熊貓的排卵時機。

技術領域

本發(fā)明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條、其制備方法及應用。

背景技術

大熊貓在一年中只有一次排卵機會，并且對于雌性個體來講能接受自然交配的時間也非常短，最短的只有幾個小時，如果在不恰當?shù)臅r機將雌雄個體配對進行自然交配將會導致動物間激烈的打斗，引起動物的傷亡；而若采用人工授精，對人工授精時機的把握同樣非常重要，由于大熊貓人工授精需要在麻醉狀態(tài)下進行，已有的研究結果證明，若在排卵前對動物實施麻醉，可導致排卵抑制與延遲，而卵子維持授精能力的時間相對于精子而言要短得多，因此確定大熊貓確切排卵與配種以及人工授精時機是大熊貓成功繁育的關鍵技術。而目前對大熊貓排卵規(guī)律及其影響因素的了解還比較有限，對確切配種的時機國內外尚無一致意見，這也是導致目前大熊貓繁殖效率在年度間波動，繁殖效率不穩(wěn)定的重要原因。目前對大熊貓排卵規(guī)律的認識上，主要通過監(jiān)測發(fā)情期雌激素與孕激素水平變化情況以及發(fā)情行為觀察加上經(jīng)驗進行綜合判斷，對配種時機(自然交配與人工授精)的把握目前國內外尚無統(tǒng)一認識。

促黃體素(LH)是腦垂體前葉嗜堿性細胞分泌的糖蛋白激素，由α和β兩個亞基組成，β亞基決定激素的特異抗原性和特異功能，但需與α亞基結合才具有生物學活性，是一種可以直接誘發(fā)排卵的生殖激素，通常情況下動物LH峰值與排卵間隔時間相對固定，檢測LH是確定適時人工授精與適時自然交配指標的有效手段。

膠體金技術是一種新型的免疫標記物，在很多領域都得到了廣泛應用，具有使用方便快速，便于基層使用和現(xiàn)場使用，所有反應能在15分鐘內完成；成本低，不需要特殊的儀器設備；應用范圍廣，可適應多種檢測條件；標記物穩(wěn)定，標記樣品在4℃貯存兩年年以上，無信號衰減現(xiàn)象；膠體金本身為紅色，不需要加入發(fā)色試劑，對人體無毒害。由于種屬差異的原因，目前還沒有大熊貓LH膠體金檢測技術。

發(fā)明內容

本發(fā)明目的是提供一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條、其制備方法及應用，通過獲得抗大熊貓LH多克隆抗體和單克隆抗體，結合膠體金免疫層析技術制備成膠體金免疫層析試紙條，本發(fā)明的提出為大熊貓排卵監(jiān)測提供了一種敏感，特異的檢測方法，對大熊貓的繁育有重要的指導意義，解決了上述還沒有大熊貓LH膠體金檢測技術的缺陷。

一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條，包括膠條，所述膠條包括順序搭接的樣品墊，膠體金墊，硝酸纖維素膜和吸水墊，所述膠體金墊上涂有覆蓋有膠體金顆粒標記的鼠抗大熊貓促黃體素β亞基單克隆抗體和兔抗大熊貓促黃體素β亞基多克隆抗體混合液層，所述硝酸纖維素膜上包被有Protein A的質控線，以及包被有兔抗大熊貓促黃體素β亞基多克隆抗體的檢測線，所述樣品墊上還設置有點樣孔。

使用時，在點樣孔滴加測試尿液50ul，反應5-10min觀察結果；

結果判定：

陽性結果：質控線和檢測線都出現(xiàn)紅色條帶，其中檢測線紅色越深，LH含量越高；

陰性結果：僅質控線出現(xiàn)一條紅色條帶；

無效結果：如質控線無條帶出現(xiàn)，不論檢測線是否出現(xiàn)紅色條帶結果均判定為無效。