[發明專利]一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條、其制備方法及應用

在審

• 申請號: 201811294003.5
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109212239A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 蔡開來;侯蓉;張志和;張夢詩;劉玉良;王涓
• 申請（專利權）人: 成都大熊貓繁育研究基地
• 主分類號: G01N33/76
• 分類號: G01N33/76;G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 成都弘毅天承知識產權代理有限公司 51230
• 代理人: 李春霖

1.一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：包括膠條，所述膠條包括順序搭接的樣品墊(1)，膠體金墊(2)，硝酸纖維素膜(7)和吸水墊(5)，所述膠體金墊(2)上涂有覆蓋有膠體金顆粒標記的鼠抗大熊貓促黃體素β亞基單克隆抗體和兔抗大熊貓促黃體素β亞基多克隆抗體混合液層，所述硝酸纖維素膜(7)上包被有兔抗大熊貓促黃體素β亞基多克隆抗體的檢測線(3)，以及包被有Protein A的質控線(4)，所述樣品墊(1)上還設置有點樣孔；所述的鼠抗大熊貓促黃體素β亞基單克隆抗體由保藏在中國典型培養物保藏中心的，菌種保藏編號為CCTCC NO:C2018128的雜交瘤細胞株14081-1-9分泌產生。

2.根據權利要求1所述的一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述樣品墊(1)為玻璃纖維膜或聚酯纖維膜。

3.根據權利要求1所述的一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述膠體金墊(2)為玻璃纖維膜。

4.根據權利要求1所述的一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：還包括底板(6)，所述膠條設置在所述底板(6)上。

5.根據權利要求4所述的一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條，其特征在于：所述底板(6)為聚氯乙烯膠板。

6.一種如權利要求1-5任一項所述的大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)吸水墊(5)的制備

將吸水紙剪裁即得吸水墊(5)；

(2)點膜

將兔抗大熊貓促黃體素β亞基多克隆抗作為檢測線(3)包被在硝酸纖維素膜(7)上，將質控線(4)包被protein-A用磷酸鹽緩沖液稀釋至0.25mg/ml作為質控線(4)包被在硝酸纖維素膜(7)上，室溫下干燥；

(3)膠體金墊(2)的制備

將鼠抗大熊貓促黃體素β亞基單克隆抗體和兔抗大熊貓促黃體素β亞基多克隆抗體混合液于離心管中經膠體金標記，并經牛血清白蛋白封閉后，在10000-12000r/min轉速下離心15-25min，棄去上清，用500ul金復溶液將沉淀復溶后鋪在6mm×1 50mm的金墊上干燥；所述的鼠抗大熊貓促黃體素β亞基單克隆抗體由保藏在中國典型培養物保藏中心的，菌種保藏編號為CCTCC NO:C2018128的雜交瘤細胞株14081-1-9分泌產生；

(4)樣品墊(1)的制備

將玻璃纖維膜放入封閉液中浸濕，取出，于37～40℃條件下干燥6～12小時，得樣品墊(1)，然后置干燥器中室溫保存；

(5)試紙條的組裝

在底板(6)的一面從上至下依次粘貼吸水墊(5)、硝酸纖維素膜(7)、膠體金墊(2)、樣品墊(1)，各相鄰連接處交疊連接，交疊長度為1-3mm，用斬切機切成3.2-3.8mm寬的試紙條，即得大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條。

7.根據權利要求6所述的一種大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于：步驟(5)試紙條的組裝中，所述試紙條的寬度為3.5mm。

8.一種如權利要求1-5任一項所述的大熊貓促黃體素膠體金免疫層析試紙條的應用：其特征在于：方法如下：

(1)收集雌性大熊貓發情高峰期時連續4個尿樣，每個尿樣間隔時間約為4小時，每個尿樣吸取50ul，滴加在試紙條上反應，5-10min后判讀結果；

(2)檢測結果：

a陽性結果：質控線(4)和檢測線(3)都出現紅色條帶，其中檢測線(3)紅色越深，LH含量越高；

b陰性結果：僅質控線(4)出現一條紅色條帶；

c無效結果：如質控線(4)無條帶出現，不論檢測線(3)是否出現紅色條帶結果均判定為無效。