[發明專利]一種用于血小板無力癥的基因檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201811293663.1
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN111118137A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 汪純;楊紹杰;吳燕杰;王凱;崔春艷
• 申請（專利權）人: 廣東中科康儀生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 談杰

本發明公開了一種用于血小板無力癥的基因檢測方法及試劑盒，其特征在于包括：血小板無力癥患者cDNA的PCR擴增、測序發現患者ITGA2B基因第508～607位(編碼區的第477～506位)發生缺失,導致CDS 160～CDS192缺失。通過gDNA的檢測確定患者為EXON4的第72位堿基C→G點突變和intron 4的+5位G→C點突變復合突變體，使用金屬溶膠液、石英片和試劑組；本試劑盒對血小板無力癥進行基因診斷時,先通過對血小板無力癥相關ITGA2B和ITGA3基因mRNA檢測,再對具體異常位置gDNA進一步分析的方法是可行可靠的。并且相對于直接對gDNA各個外顯子做PCR擴增測序的方法，該方法操作簡單、快速，無需進行前期質粒載體構建，可有效縮短實驗周期和成本。

技術領域

本發明涉及血小板無力癥基因檢測技術領域，具體為一種用于血小板無力癥的基因檢測方法及試劑盒。

背景技術

血小板無力癥1918年由Glanzmann首先報道本病，故本病又稱“Glanzmann病(Glanzmann thrombasthenia，GT)”，是一種遺傳性出血病。特點為血細胞對多種生理誘聚劑反應低下或缺如，由血小板膜糖蛋白Ⅱb(GPⅡb) 和（或）Ⅲa(GPⅢa)質或量的異常引起。1990年國際血栓與止血學會標準化委員會將GT定義為由于GPⅡb或GPⅢa基因缺陷引起的血小板對多種誘聚劑（如腺苷二磷酸、凝血酶、膠原等）的先天性遺傳性無聚集或反應減低。

本病是由于血小板膜糖蛋白Ⅱb(GPⅡb）和(或）Ⅲa(GPⅢa）質或量的異常引起。GPⅡb-Ⅲa復合物是鈣依賴性多聚體，是纖維蛋白原受體，也能結合vWF、纖維結合蛋白和血栓敏感蛋白，在各種生理誘聚劑，如ADP、TXA2的作用下，介導血小板聚集。因此受體的異常可導致血管損傷處血小板血栓不能形成發生出血不止或淤斑。

GPⅡb-Ⅲa受體同時也能幫助血小板α顆粒攝取纖維蛋白原，因此，GT患者血小板纖維蛋白原水平顯著下降。GPⅡb-Ⅲa復合物是連接膜外側的纖維蛋白原和膜內側的肌動蛋白絲主要附著點，參與血塊回縮功能故GT患者常出現血塊。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于血小板無力癥的基因檢測方法及試劑盒，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

1 . 一種用于血小板無力癥的基因檢測方法及試劑盒，其特征在于包括：血小板無力癥患者cDNA的PCR擴增、測序發現患者ITGA2B基因第508～607位(編碼區的第477～506位)發生缺失,導致CDS 160～CDS192缺失。通過gDNA的檢測確定患者為EXON4的第72位堿基C→G點突變和intron 4的+5位G→C點突變復合突變體。

方法：

對血小板無力癥進行基因診斷時,先通過對血小板無力癥相關ITGA2B和ITGA3基因mRNA檢測,再對具體異常位置gDNA進一步分析的方法是可行可靠的。并且相對于直接對gDNA各個外顯子做PCR擴增測序的方法

PCR擴增，反應體系為模板DNA 1ng/ uL、引物1uL、H2O 3 .8uL、2×Taq PCR MasrerMix 50uL；和/或，所述PCR反應的反應程序為 95℃預變性2min，95℃預變性30s，60℃退火溫度30s，72℃延伸1min，循環次數30次，72℃再 延伸10min。

試劑盒：