[發明專利]一種用于血小板無力癥的基因檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201811293663.1
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN111118137A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 汪純;楊紹杰;吳燕杰;王凱;崔春艷
• 申請（專利權）人: 廣東中科康儀生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 談杰

1.一種用于血小板無力癥的基因檢測方法及試劑盒，其特征在于包括：血小板無力癥患者cDNA的PCR擴增、測序發現患者ITGA2B基因第508～607位(編碼區的第477～506位)發生缺失,導致CDS 160～CDS192缺失；

通過gDNA的檢測確定患者為EXON4的第72位堿基C→G點突變和intron 4的+5位G→C點突變復合突變體，金屬溶膠液，

方法：

對血小板無力癥進行基因診斷時,先通過對血小板無力癥相關ITGA2B和ITGA3基因mRNA檢測,再對具體異常位置gDNA進一步分析的方法是可行可靠的；

并且相對于直接對gDNA各個外顯子做PCR擴增測序的方法；

PCR擴增，反應體系為模板DNA 1ng/ uL、引物1uL、H2O 3 .8uL、2×Taq PCR MasrerMix 50uL；和/或，所述PCR反應的反應程序為 95℃預變性2min，95℃預變性30s，60℃退火溫度30s，72℃延伸1min，循環次數30次，72℃再延伸10min；

金屬溶膠液：

金屬溶膠液為金溶膠液或銀溶膠液；所述的銀溶膠的制備方法如下：常溫下將2 .5mL10-2mol/L AgNO3加入到75mL蒸餾水中，加入5mL of 10-2mol/L巰基乙酸；攪拌10min后滴入2 .5mL10-2mol/L NaI，攪拌20min后，得到淺綠色的AgI溶膠，加入20mg NaBH4還原，繼續攪拌約10min，生成黃褐色銀溶膠，得到的是形狀均一的球形粒子；

試劑盒：

包括試劑組成為：D-吡喃葡萄糖 0 .25-0 .5g/L，甘氨酸-鹽酸緩沖液 0 .1mol/L，NADH 25mmol/L，葡萄糖 0 .1-0 .5g/L，腺苷三磷酸 2mmol/L，磷酸烯醇式丙酮酸，TOOS緩沖液 0 .1mol/L，聚乙二醇 1-1 .5g/L，喃葡萄糖 0 .05-0 .1g/L；丙氨酸脫氫酶 1000-5000U/L，2mmol/L，CTAB 5mmol/L，三氯甲烷 0 .1ml/L，丙三醇 0 .1-0 .75ml/L，聚乙二醇0 .3-0 .5g/L，葡聚糖 1-2 .34g/L，D-吡，己糖激酶 2500-4000U/L，丙酮酸激酶 3000U/L

葡聚糖 0 .7-1 .5g/L。

2.根據權利要求1所述的一種用于血小板無力癥的基因檢測方法及試劑盒，其特征在于：所述的石英片為波數范圍是700-2000cm-1無明顯拉曼峰的基底石英片。