[發明專利]一種新型大鼠高血壓模型的建立方法及其應用

在審

• 申請號: 201811292796.7
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109662974A
• 公開（公告）日: 2019-04-23
• 發明（設計）人: 歐和生;羅雪蘭
• 申請（專利權）人: 廣西國際壯醫醫院
• 主分類號: A61K31/713
• 分類號: A61K31/713;A61K49/00
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 郭智

本發明公開了一種新型大鼠高血壓模型的建立方法及其應用。本發明公開的新型大鼠高血壓模型的建立方法，該方法包括步驟有：(a)提供人內含子源性27nt?miRNA序列，構建其高表達質粒；(b)將(a)步驟中的高表達質粒與X?treme GENE HP DNA轉染試劑按一定比例混合，經生理鹽水稀釋后，通過大鼠尾靜脈瞬時高速注射進入SD大鼠體內，致使大鼠血壓升高，并維持高壓狀態，從而形成一種新型的大鼠高血壓模型。本發明的大鼠高血壓模型是一種有效的動物疾病模型，可用于驗證人內含子源性27nt?miRNA對正常大鼠血壓、血管舒張因子的影響，可用于降壓藥物的篩選，應用前景較廣。

技術領域

本發明涉及基因重組以及動物瞬時注射技術領域，具體涉及一種新型大鼠高血壓模型的建立方法及應用。

背景技術

心血管疾病是當今全球發病率與死亡率最高的疾病之一，高血壓病則是最常見的心血管疾病，同時被稱為嚴重危害人類健康的“第一殺手”。世界衛生組織(WHO)對高血壓定義為：在未使用抗高血壓藥物的情況下，收縮壓≥140mmHg和/或舒張壓≥90mmHg。高血壓又被分為1、2、3級：1)1級高血壓，又稱輕度高血壓，收縮壓140～159mmHg或舒張壓90～99mmHg；2)2級高血壓，又稱中度高血壓，收縮壓160～179mmHg或舒張壓100～109mmHg；3)3級高血壓，又稱重度高血壓，收縮壓≥180mmHg或舒張壓≥110mmHg。此外，根據高血壓患者是否同時具有危險因素，還可以分為低危、中危、高危和極高危組。據統計高血壓患者全球達10億，中國達2億，美國在5千萬以上；值得關注的是,美國心臟協會在2017年底修改高血壓標準為收縮壓≥130mmHg和/或舒張壓≥80mmHg,顯示高血壓的防治越來越引起高度重視；按照修改后的高血壓標準，全球高血壓患者的數目至少將翻一倍以上。

高血壓病初期，大部分的患者是無癥狀的，或偶爾出現頭暈、頭痛等不典型癥狀，患者沒有感覺或感覺不深，但是沒有感覺并不代表沒有損害。一些身體的癥狀不易被發現，如全身細小動脈痙攣，隨著病情的發展，細小動脈卻在漸漸發生硬化。這種變化，多發于冠狀動脈，腦動脈、腎動脈，所以說高血壓沒有癥狀，不代表沒危害，它會慢慢破壞患者的心、腦、腎器官。如果長期不治療，高血壓的危害會最大化，持續的高血壓會引起嚴重的心、腦、腎等器官損傷或疾病，從而導致各種并發癥，嚴重影響健康甚至生命。

miRNAs與高血壓的關系。有關研究表明，miRNA參與高血壓發生發展的多個環節，主要有以下幾個方面：1)miRNAs影響血管內皮細胞功能。持續的血管腔內高壓導致內皮細胞功能障礙，失去功能性微血管、血管生成缺陷加重高血壓與相關器官損害。miR-125a/b-5p抑制血管內皮細胞內皮素-1的表達，而miR-155又能引起內皮eNOS轉錄下調、NO等血管活性因子釋放降低，從而影響血壓調節。2)miRNAs參與腎素-血管緊張素-醛固酮系統功能調節。血管緊張素Ⅱ是RAAS系統的主要生物效應分子，既能使小動脈血管收縮，又能激活交感神經系統，促進醛固酮產生。miR-181a抑制腎交感神經活性和降低腎素的分泌；血管緊張素轉換酶(ACE)是miR-143/145的靶基因，miRNA143/145增加導致ACE基因表達減少；miR-421抑制ACE2蛋白轉錄表達；miR-124和miR-135a可以通過降低鹽皮質激素受體蛋白，抑制腎鹽潴留；miRNA對RAAS系統產生的這些抑制效應將會降低血壓。3)miRNAs參與血管平滑肌細胞增殖和分化調節。高血壓病理過程中，血管平滑肌細胞的增殖和分化異常、纖維組織增生肥厚是導致血管病理性重構和管腔狹窄的主要因素。miRNA-143和miRNA-145通過抑制平滑肌細胞增殖，促進細胞的分化，miR-204、miR-124參與調控血管平滑肌細胞及成纖維細胞調節血管內膜重構，而miR-9靶向調控肥厚性通路的活化T細胞核因子C3(NFATc3)和心肌素，逆轉肥厚性轉變。