[發明專利]一種用于馬鈴薯的苗期耐凍性鑒定方法

在審

• 申請號: 201811289793.8
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109444204A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 李飛;金黎平;雷尊國;卞春松;徐建飛;段紹光;羅小波;尹旺
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所;貴州省生物技術研究所
• 主分類號: G01N25/00
• 分類號: G01N25/00
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 商小川

本發明公開了一種用于馬鈴薯的苗期耐凍性鑒定方法，它包括如下步驟：一、取樣用加冰蒸餾水沖洗后放入試管編號；二、將對照試管放入冰中，其余試管放入水浴鍋中；三、在水浴鍋的慢慢降溫進行冷凍；四、將解凍后的葉片切成小條裝入試管中，然后加入蒸餾水；五、用真空泵抽氣，在振蕩器上振動，靜置后測電導率R1；六、將試管放入鍋中滅菌，冷卻后測電導率R2；七、將每個溫度對應的3次電解質滲出率的平均值帶入方程進行非線性擬合，方程拐點即為材料的半致死溫度點即可得出材料的耐凍性。本方法能在較短時間之內快速鑒定馬鈴薯不同基因型的耐凍性，不受時間和季節的限制，且數據精確可靠，為馬鈴薯耐凍性研究提供重要依據，取得很好的技術效果。

技術領域

本發明涉及一種馬鈴薯，尤其涉及一種用于馬鈴薯的苗期耐凍性鑒定方法，屬于農業生產技術領域。

背景技術

國內尚未有馬鈴薯耐凍性研究報告，國外對馬鈴薯的耐凍性鑒定方法目前常用是人工冷凍鑒定和田間霜凍鑒定。人工冷凍鑒定操作簡單、費用不多且結果較為準確，Chen(1999)評價了20個不同種馬鈴薯材料的耐凍性，其LT₅₀值都精確到小數點后1位。同時人工冷凍鑒定不受季節的限制，能夠對馬鈴薯材料的耐凍性進行量化，能同時反映出材料的冷馴化前的耐凍性、冷馴化后的耐凍性和寒冷馴化能力，其缺點是需要專用設備。

田間霜凍鑒定優點是適合大批樣本的鑒定，如Vega在1995年通過田間鑒定了101種的2635份馬鈴薯材料。由此可見田間自然霜凍鑒定具有快速，方便，經濟等優勢，可用于大批樣本的耐凍性鑒定和篩選。其缺點是易受季節和環境溫度溫等的影響，需要在特殊的季節，同時冷凍時間和溫度不能人為控制，溫度過高凍害損傷程度不夠，溫度過低造成參試材料全部凍死的可能，因此需提前查看天氣預報掌握天氣情況。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提供一種用于馬鈴薯的苗期耐凍性鑒定方法，該方法處理方便，操作簡單，重復性好，經濟實用，可在短時間內對大批量材料進行耐凍性性鑒定，檢測效率高，檢測的成本低，解決了上述存在的問題。

本發明的技術方案為：一種用于馬鈴薯的苗期耐凍性鑒定方法，它包括如下步驟：

一、取成熟葉片用加冰的蒸餾水沖洗后，將葉片放入帶蓋的試管（25×150mm）底部，每管放一片葉子（共24片），葉面朝下，每管編號；

二、將對照試管立即放入冰中，其余試管依次放入水浴鍋中（水浴鍋中的媒介為1：1的乙二醇和蒸餾水混合物）；

三、水浴鍋的初始溫度設為0℃，保持30min，降到-0.5℃再保持30min；

四、溫度從-0.5℃降到-1℃并保持1h，-1℃保持30min時在每管中加入一小塊冰，再保持30min后降低到-1.5℃，-1.5℃保持1h；

五、溫度從-1.5℃降到-2℃并持續30min后即可取第一次樣品，每次取3管；

六、溫度從-2℃降到目標溫度，保持30min后取樣，依次類推，降溫直到目標最低溫度，并分別取樣，將試管取出后插入冰中，于4℃條件下解凍過夜；

七、將解凍后的葉片切成5mm的小條裝入試管中，然后加入25ml蒸餾水；

八、用真空泵以0.1MP的真空度抽氣5min，在振蕩器上以220轉/min的速度振動1h，靜置后測電導率R1；

九、將試管放入高壓滅菌鍋中121℃處理20min，冷卻至室溫后測電導率R2，電解質滲出率（%）=R1/R2×100%；

十、將每個溫度對應的3次電解質滲出率的平均值帶入Logistic方程進行非線性擬合，方程拐點即為材料的半致死溫度點（LT₅₀），即可得出材料的耐凍性。

所述步驟一中的成熟葉片為用薯塊播種的材料出苗后生長4-6周后的成熟葉片。