[發明專利]一種用于馬鈴薯的苗期耐凍性鑒定方法

在審

• 申請號: 201811289793.8
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109444204A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 李飛;金黎平;雷尊國;卞春松;徐建飛;段紹光;羅小波;尹旺
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所;貴州省生物技術研究所
• 主分類號: G01N25/00
• 分類號: G01N25/00
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 商小川

1.一種用于馬鈴薯的苗期耐凍性鑒定方法，其特征在于：它包括如下步驟：

一、取成熟葉片用加冰的蒸餾水沖洗后，將葉片放入帶蓋的試管（25×150mm）底部，每管放一片葉子（共24片），葉面朝下，每管編號；

二、將對照試管立即放入冰中，其余試管依次放入水浴鍋中（水浴鍋中的媒介為1：1的乙二醇和蒸餾水混合物）；

三、水浴鍋的初始溫度設為0℃，保持30min，降到-0.5℃再保持30min；

四、溫度從-0.5℃降到-1℃并保持1h，-1℃保持30min時在每管中加入一小塊冰，再保持30min后降低到-1.5℃，-1.5℃保持1h；

五、溫度從-1.5℃降到-2℃并持續30min后即可取第一次樣品，每次取3管；

六、溫度從-2℃降到目標溫度，保持30min后取樣，依次類推，降溫直到目標最低溫度，并分別取樣，將試管取出后插入冰中，于4℃條件下解凍過夜；

七、將解凍后的葉片切成5mm的小條裝入試管中，然后加入25ml蒸餾水；

八、用真空泵以0.1MP的真空度抽氣5min，在振蕩器上以220轉/min的速度振動1h，靜置后測電導率R1；

九、將試管放入高壓滅菌鍋中121℃處理20min，冷卻至室溫后測電導率R2，電解質滲出率（%）=R1/R2×100%；

十、將每個溫度對應的3次電解質滲出率的平均值帶入Logistic方程進行非線性擬合，方程拐點即為材料的半致死溫度點（LT₅₀），即可得出材料的耐凍性。

2.根據權利要求1所述的用于馬鈴薯的苗期耐凍性鑒定方法，其特征在于：所述步驟一中的成熟葉片為用薯塊播種的材料出苗后生長4-6周后的成熟葉片。

3.根據權利要求2所述的用于馬鈴薯的苗期耐凍性鑒定方法，其特征在于：所述馬鈴薯材料播種在10cm×10cm塑料盆中（栽培基質為1：1的泥炭土和蛭石），栽培種播種到15cm×15cm的塑料盆中，每份材料播種6-9盆，每盆1株，出苗后的生長溫度為白天20℃，晚上18℃，光照時間為14h、光照強度為400μmol.m^-2.s^-1。