[發明專利]一種GST-like標簽蛋白在大腸桿菌表達體系中的應用在審
| 申請號： | 201811288350.7 | 申請日： | 2019-01-18 |
| 公開（公告）號： | CN109797163A | 公開（公告）日： | 2019-05-24 |
| 發明（設計）人： | 王峰 | 申請（專利權）人： | 無錫佰翱得生物科學有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/65 | 分類號： | C12N15/65;C12N15/70;C12P21/02 |
| 代理公司： | 東莞市科安知識產權代理事務所(普通合伙) 44284 | 代理人： | 王勇剛 |
| 地址： | 214000 江蘇省無錫市江陰市城東街*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 標簽蛋白 大腸桿菌表達 蛋白 應用 生物技術領域 內源性蛋白 結合能力 親和標簽 昆蟲 替代 研究 | ||
1.一種GST-like標簽蛋白在大腸桿菌表達體系中的應用，該GST-like標簽蛋白的序列如SEQUENCENo.1所示，具體為：
MPIDLYYVPGSAPCRAVLLTAKALNLNLNLKLVDLHHGEHLKPEYIKLNPQHTVPTLVDDGFSIWESRAIITYLVNKYGKGSSLYPEEPKARALVDQRLYFDIGTLYQRFADYFYPQVFGGAPADKDKLAKIEDALQLLNTFLEGQKFCAGPTLTLADLSLVASVSSFEASDVDFKKYPNKRWYETVKSSAPGYLEANEKGLDAFKGLVNSMMKK。
2.權利要求1所述的GST-like標簽蛋白在大腸桿菌中的表達方法，其特征在于，將表達GST-like標簽蛋白的核苷酸序列導入大腸桿菌表達載體中構建重組質粒,使GST-like標簽蛋白插入在目的蛋白的N末端與其融合；構建成功的重組質粒進行轉化、擴大培養，異丙基硫代-Β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導表達。
3.如權利要求1所述的GST-like標簽蛋白在大腸桿菌中的蛋白表達方法，其特征在于，所述大腸桿菌表達載體為pET28a-N-His-TEV。
4.用權利要求1所述的GST-like標簽蛋白純化大腸桿菌表達目的蛋白的方法，其特征在于，
(1)將表達GST-like標簽蛋白的核苷酸序列導入大腸桿菌表達載體中構建重組質粒,使GST-like標簽蛋白插入在目的蛋白的N末端與其融合；構建成功的重組質粒進行轉化、擴大培養，異丙基硫代-Β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導表達GST-like標簽蛋白與目的蛋白的融合蛋白；
(2)收集過夜培養的菌液，超聲破碎菌體，收集可溶部分，應用GSTrapFF柱子對可溶部分進行純化，用濃度為5mM-25mM的GSH進行洗脫，得到純化融合蛋白。
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