[發(fā)明專利]高毒力株幽門螺桿菌的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法和試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811287718.8
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109182569A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪運(yùn)山;曹翠明;楊煒華;裴鳳艷
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南市中心醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 鄭平

1.一種檢測高毒力株幽門螺桿菌的LAMP檢測用引物，其特征在于，所述LAMP檢測引物包括：

F3:5'-GGGAGAAAAATGTTACTCTTCA-3'；

B3:5'-CGAAACTAGTGATAGCGAGAT-3'；

FIP:5'-GAGGCGTTGGTGTATTTGAA-CCTAAAACATGATGGCGTG-3'；

BIP:5'-GAATCCCAATAAGGGTGTAGGCG-GCAAATTAAAGATAGCTACCTTGT-3'；

LB:5'-GGCGTTTCCCATTTAGAAGTAGG-3'。

2.權(quán)利要求1所述引物組在基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法檢測高毒力株幽門螺桿菌中的應(yīng)用。

3.一種檢測高毒力株幽門螺桿菌的LAMP檢測方法，其特征在于，所述方法包括使用權(quán)利要求1所述LAMP檢測用引物進(jìn)行LAMP擴(kuò)增。

4.如權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括：

S1.配置LAMP反應(yīng)體系，通過LAMP反應(yīng)程序?qū)Ψ磻?yīng)模板進(jìn)行擴(kuò)增；

S2.通過肉眼觀察反應(yīng)管顏色變化判斷檢測樣品中是否含有高毒力株幽門螺桿菌。

5.如權(quán)利要求4所述的檢測方法，其特征在于，

所述步驟S1中，

LAMP反應(yīng)體系為：5pM的外引物F3和B3各1μl；40pM的內(nèi)引物FIP和BIP各1μl；20pM環(huán)引物L(fēng)B1μl；2×反應(yīng)緩沖液12.5μl；1μl的BstDNA聚合酶；熒光染料1μl；2μl的待測DNA模板，加去離子水至25μl體系；

優(yōu)選的，所述待測DNA模板包括但不限于從純培養(yǎng)菌落、胃粘膜組織、胃液、腸液、唾液、牙斑、糞便中獲得的DNA樣品；

所述DNA樣品制備方法為：將待測樣品進(jìn)行沸水浴處理10min，12000rpm×4min離心即得；

LAMP反應(yīng)條件為：63℃恒溫60min。

6.如權(quán)利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟S2中，

如肉眼觀察反應(yīng)產(chǎn)物為綠色渾濁液體，則確認(rèn)含有高毒力株幽門螺桿菌；如反應(yīng)產(chǎn)物為橙色透明液體，則表明不含有高毒力株幽門螺桿菌。

7.一種高毒力株幽門螺桿菌的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1所述引物組、反應(yīng)緩沖液和BstDNA聚合酶。

8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述反應(yīng)緩沖液組分如下：

Tris-HCl 0.8μmol；KCl 0.4μmol；MgSO₄ 0.32μmol；(HN4)₂SO₄ 0.4μmol；Tween20 0.04μl；甜菜堿32μmol；4×dNTPs 0.056μmol。

9.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括熒光染料。

10.權(quán)利要求7-9任一項(xiàng)所述試劑盒在基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法檢測高毒力株幽門螺桿菌中的應(yīng)用。