[發明專利]一種人鼠嵌合單克隆抗體生物類似藥的純化方法

有效

• 申請號: 201811287090.1
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109320611B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 鄭子榮;彭彼得;劉瑩;曾建成
• 申請（專利權）人: 鼎康（武漢）生物醫藥有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K1/18
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;余化鵬

1.一種利妥昔單抗的純化方法，包括將利妥昔單抗病毒滅活液上樣至強陽離子層析柱進行純化，其特征在于，所述純化在上樣后還包括以下步驟：

（1）平衡步驟，在所述層析柱中加入2-5個柱體積的平衡緩沖液，所述平衡緩沖液含55~65 mM的鈉鹽溶液；

（2）淋洗步驟，在所述層析柱中加入2-6個柱體積的淋洗緩沖液；

（3）再平衡步驟，在所述層析柱中加入0.5-2個柱體積的平衡緩沖液；和

（4）洗脫步驟，在所述層析柱中加入5-8個柱體積的洗脫緩沖液，所述洗脫緩沖液含135~150 mM的鈉鹽溶液；

其中，所述強陽離子型層析柱的填料為POROS 50HS；所述平衡緩沖液、淋洗緩沖液和洗脫緩沖液的pH值為5.4-5.6；

所述平衡緩沖液、淋洗緩沖液和洗脫緩沖液的緩沖體系中還包括MES；所述鈉鹽溶液為NaCl溶液；所述MES的濃度為50 mM；

步驟（2）中，淋洗采用包含A相、B相兩種緩沖液的漸進式梯度淋洗法，所述A相為60 mMNaCl的平衡緩沖液，所述B相為115 mM NaCl的淋洗緩沖液；在所述淋洗的過程中，所述A相的體積百分比由淋洗起始100%梯降至淋洗結束0%，所述B相的體積百分比由淋洗起始0%梯升至淋洗結束100%。

2.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，在所述上樣前還有（0）預平衡步驟，在所述層析柱中加入3-5個柱體積的預平衡緩沖液，所述預平衡緩沖液含55~65 mM的鈉鹽溶液，pH值為5.4-5.6。

3.根據權利要求2所述的純化方法，其特征在于，所述（1）平衡步驟中，在所述層析柱中加入3-4個柱體積的平衡緩沖液；所述（2）淋洗步驟中，在所述層析柱中加入3-5個柱體積的淋洗緩沖液；所述（3）再平衡步驟中，在所述層析柱中加入0.9~1.5個柱體積的平衡緩沖液；和所述（4）洗脫步驟中，在所述層析柱中加入6-7個柱體積的洗脫緩沖液。

4.根據權利要求3所述的純化方法，其特征在于，所述（0）預平衡步驟中，在所述層析柱中加入4個柱體積的預平衡緩沖液。

5.根據權利要求1所述的純化方法，其特征在于，所述利妥昔單抗病毒滅活液為利妥昔單抗病毒滅活過濾液。

6.根據權利要求2所述的純化方法，其特征在于，所述平衡緩沖液中NaCl的濃度為60mM，pH為5.5，所述洗脫緩沖液中NaCl的濃度為143 mM，pH為5.5；和，所述預平衡緩沖液中，所述MES的濃度為250mM，所述NaCl的濃度為60 mM，pH為5.5。

7.根據權利要求6所述的純化方法，其特征在于，所述淋洗緩沖液中NaCl的濃度為115mM，pH為5.5。