[發明專利]一種層析和超濾分離技術制備依諾肝素鈉的方法

在審

• 申請號: 201811286659.2
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109485749A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 胡著陽;魏超娟;黃優生;耿衛鋒;李國龍
• 申請（專利權）人: 江西浩然生物醫藥有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 南昌豐擇知識產權代理事務所(普通合伙) 36137
• 代理人: 吳稱生

1.一種層析和超濾分離技術制備依諾肝素鈉的方法，其特征在于方法步驟如下：

(1)肝素芐索氯銨鹽的制備：將肝素鈉水溶液與芐索氯銨水溶液以：1：2～3的體積混合，在低于50℃條件下進行反應30nim～60nim,離心，收集沉淀，在50～60℃條件下干燥，得到含水量低于5％的肝素季銨鹽；

(2)肝素芐基脂的制備：將(1)得到的肝素季銨鹽加入3～7倍質量的N,N-二甲基甲酰胺中，在30～70℃條件下攪拌至充分溶解，加入0.5～4倍質量的氯化芐，保持攪拌，反應20～40小時，過濾，向濾液中加入9～15％體積的醋酸鈉甲醇溶液，析出沉淀，離心，收集沉淀，用醋酸鈉甲醇溶液洗滌，烘干，得到脂化率大于11％的肝素芐基脂；

(3)肝素芐基脂的裂解：將(2)得到的肝素芐基脂溶于純化水中，在40～65℃條件下攪拌加入5％～10％質量的氫氧化鈉，反應30～90nim，用2M鹽酸調pH至6～8，過濾，加入10％體積的氯化鈉溶液，加入4倍體積的甲醇，放置12小時，收集沉淀，得到依諾肝素鈉粗品；

(4)依諾肝素鈉的氧化脫色：向(3)得到依諾肝素鈉粗品中加入依諾肝素鈉粗品5～15倍質量的純化水，完全溶解后，加入0.2％～1％體積的過氧化氫，反應6～12小時，過濾，加入10％質量的氯化鈉，加入4倍體積的甲醇，干燥，得到水分低于5％的依諾肝素鈉；

(5)離子交換層析：取降解氧化后的依諾肝素鈉，用緩沖液溶解制成濃度為30～40mg/ml的依諾肝素鈉溶液，調pH至6.5～8.0，調電導至1～10ms/cm；安裝Q-XL層析柱，用平衡液平衡至流出液pH及電導與依諾肝素鈉溶液一致，用依諾肝素鈉溶液上樣，上樣結束后用少量平衡液沖洗，再用洗滌液即0.4～0.5M NaCl溶液清洗，觀察流出液對280nm波長紫外光吸收值曲線即UV280曲線，待曲線平穩后，用洗脫液即1.5～2.0M NaCl溶液進行洗脫，根據UV280曲線收集洗脫峰對應的洗脫流出液；

(6)超濾濃縮，凍干：收集的洗脫流出液用0.45μm的濾芯過濾，濾液用孔徑小于1kD的超濾膜進行超濾濃縮。

2.根據權利要求1所述的一種層析和超濾分離技術制備依諾肝素鈉的方法，其特征在于：步驟(5)離子交換層析和步驟(6)超濾濃縮具體為:粗品依諾肝素經離子交換層析柱去除小分子雜質，經超濾濃縮技術脫鹽并將層析柱洗脫流出液濃縮。