[發(fā)明專利]一種層析和超濾分離技術制備依諾肝素鈉的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811286659.2
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109485749A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發(fā)明（設計）人: 胡著陽;魏超娟;黃優(yōu)生;耿衛(wèi)鋒;李國龍
• 申請（專利權）人: 江西浩然生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 南昌豐擇知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 36137
• 代理人: 吳稱生

本發(fā)明公開一種層析和超濾分離技術制備依諾肝素鈉的方法。肝素鈉依次經(jīng)過季銨鹽鹽化、芐基酯化、堿性降解、過濾除雜、氧化脫色等處理得到依諾肝素鈉粗品；依諾肝素鈉粗品經(jīng)過離子交換層析、超濾分離、凍干得到符合要求的依諾肝素鈉精品。本發(fā)明利用離子交換層析技術對依諾肝素鈉的分子量及分布進行有效控制；通過超濾分離技術與層析技術有效的結合，達到濃縮和脫鹽的目的，減少了有機溶劑的使用，同時縮小了凍干的體積，提高了產(chǎn)能，節(jié)約了成本。

技術領域

本發(fā)明涉及一種生化藥品工藝方法，具體為一種層析和超濾分離技術制備依諾肝素鈉的方法。

背景技術

依諾肝素鈉是低分子量肝素鈉的一種，其通用名：Enoxaparin。依諾肝素鈉是由豬腸豁膜提取的肝素鈉經(jīng)酯化后得到的肝素芐基酯鈉衍生物通過堿裂解生成的低分子量肝素鈉。它由許多復雜的未定性的低聚糖組成。按照目前的了解，大部分的低聚糖在糖鏈的非還原末端具有一烯醇毗喃糖酸。肝素是世界上最有效和臨床用量最大的抗凝血藥物，主要應用于心腦血管疾病和血液透析治療，其中，其在血液透析治療中是唯一有效的特效藥物，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)肝素在血液系統(tǒng)疾病、心臟病、體外循環(huán)手術、血液凈化療法、顯微外科、肺內(nèi)科、腎病、產(chǎn)科、兒科、眼科等12個大的臨床學的40余種疾病的治療中都發(fā)揮了較好的醫(yī)療作用，而且這樣的研究還遠沒有結束，肝素完全可能衍生成為治療更多疾病的藥物。此外，低分子肝素是由肝素原料藥作為原料進一步加工成的一大類抗血栓的藥物，具有更為廣泛的臨床醫(yī)學用途，成為治療急性靜脈血栓和急性冠脈綜合征(心絞痛、心肌梗塞)等疾病的首選藥物。由于低分子量肝素類產(chǎn)品在臨床使用時可以克服一些普通肝素的缺點，如選擇性強、對動脈和靜脈血栓形成有較強的抑制作用，在抗血栓劑量下，凝血時間無明顯改變；抗血栓作用顯著增強；人體藥動學性質(zhì)顯著改善；臨床療效確切，使用安全方便，對血小板的副作用。

由于依諾肝素鈉廣闊的市場前景和現(xiàn)有生產(chǎn)技術存在重均分子控制不到位，能耗過大，污染嚴重等諸多問題，開發(fā)一種能夠適合工業(yè)生產(chǎn)使用的快速簡便的生產(chǎn)工藝成為急需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提一種層析和超濾分離技術制備依諾肝素鈉的方法，該方法通過采用離子交換層析，超濾濃縮等得到高純度的依諾肝素鈉產(chǎn)品，且該方法自動化程度高，操作便捷，環(huán)境污染小，克服原有生產(chǎn)工藝有機溶劑使用量大，重均分子量控制難，凍干機體積大等技術問題。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術方案：一種層析和超濾分離技術制備依諾肝素鈉的方法，其特征在于方法步驟如下：

(1)肝素芐索氯銨鹽的制備：將肝素鈉水溶液與芐索氯銨水溶液以：1：2～3的體積混合，在低于50℃條件下進行反應30nim～60nim,離心，收集沉淀，在50～60℃條件下干燥，得到含水量低于5％的肝素季銨鹽；

(2)肝素芐基脂的制備：將(1)得到的肝素季銨鹽加入3～7倍質(zhì)量的N,N-二甲基甲酰胺中，在30～70℃條件下攪拌至充分溶解，加入0.5～4倍質(zhì)量的氯化芐，保持攪拌，反應20～40小時，過濾，向濾液中加入9～15％體積的醋酸鈉甲醇溶液，析出沉淀，離心，收集沉淀，用醋酸鈉甲醇溶液洗滌，烘干，得到脂化率大于11％的肝素芐基脂；

(3)肝素芐基脂的裂解：將(2)得到的肝素芐基脂溶于純化水中，在40～65℃條件下攪拌加入5％～10％質(zhì)量的氫氧化鈉，反應30～90nim，用2M鹽酸調(diào)pH至6～8，過濾，加入10％體積的氯化鈉溶液，加入4倍體積的甲醇，放置12小時，收集沉淀，得到依諾肝素鈉粗品；

(4)依諾肝素鈉的氧化脫色：向(3)得到依諾肝素鈉粗品中加入依諾肝素鈉粗品5～15倍質(zhì)量的純化水，完全溶解后，加入0.2％～1％體積的過氧化氫，反應6～12小時，過濾，加入10％質(zhì)量的氯化鈉，加入4倍體積的甲醇，干燥，得到水分低于5％的依諾肝素鈉；